陆红云，祝晓静，钟 玲，黄秋艳，谢海珍，王 倩

2011年宜春市218例临床疑似重症手足口病病原学检测

*陆红云，祝晓静，钟 玲，黄秋艳，谢海珍，王 倩

(宜春市疾病预防控制中心，江西，宜春 336000)

对2011年宜春市各医院疑似重症手足口病病例样本进行实验室检测分析，从而为本地区手足口病的综合防治提供参考依据。采用real-time RT-PCR方法，对宜春市各医院采集的218份疑似重症手足口病患者的咽拭子、疱疹液、粪便、肛拭样本，进行肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A16（COX16）以及肠道病毒通用型（EV）的核酸检测。218份不同类型样本中，EV71病毒114例、COX16病毒4例、EV病毒20例。阳性率分别为52.29%、1.83%、9.17%。病例人群男性高于女性（1.38:1），1~2岁年龄段病例数最多，4~6月份为本年度重症报告病例最多的月份。2011年宜春市手足口病引起重症病例的病毒株主要以EV71型为主，应特别加强对EV71引起的重症病例的监测，提前落实抢救措施，防止病情恶化导致死亡。

手足口病；肠道病毒71型；柯萨奇病毒A组16型

手足口病是由多种肠道病毒引起的常见多发性传染病，以婴幼儿发病为主。为了解本地区引起手足口病重症病例的主要致病病原体，宜春市对2011年辖区各医院报告的218例临床疑似重症手足口病样本进行了real-time RT-PCR检测。现报告如下：

1 材料与方法

1.1 材料

采集宜春市各医院临床疑似重症手足口病病例的咽拭、疱疹液、粪便、肛拭样本进行核酸检测。

1.2 实验材料

1.2.1试剂

RNA提取试剂盒（采用德国QIAGEN公司试剂），肠道病毒通用型核酸检测试剂盒（RCR-荧光探针法）、肠道病毒71型核酸检测试剂盒（RCR-荧光探针法）、柯萨奇病毒A16型核酸检测试剂盒（RCR-荧光探针法）均采用广州中山大学达安基因股份有限公司核酸检测试剂。

1.2.2实验仪器

实时荧光PCR扩增仪为Applied Biosystems 7300 Real-Time。

1.3 方法

Real-Time RT-PCR法，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

1.3.1标本处理

咽拭和疱疹液直接提取核酸。粪便样本加入相应Hank’s液振荡混匀制成悬液，2000 r/min×5 min,离心吸取上清液，置-70℃备用。

1.3.2病毒RNA提取

按照Viral RNA mimi Extraction Kit 操作说明提取病毒RNA，提取RNA立即进行逆转录。

1.3.3Real-Time PCR

对肠道病毒通用型、肠道病毒71型、肠道病毒A组16型鉴别诊断。

提取的病毒RNA按照达安基因试剂公司提供的试剂盒说明配置反应体系，经45 ℃反转录25 min，94 ℃变性3 min,再按95 ℃×15 s→55 ℃×45 s，循环40次。反应体系为25 uL。荧光通道检测选用FAM通道。

1.3.4 结果判断

扩增曲线呈典型S型扩增曲线且Ct值 = 34.8判为阳性，无典型S型扩增曲线且Ct值＞34.8判为阴性。

2 结果

2.1 肠道病毒核酸检测结果

对218例受检者咽拭、疱疹液、粪便、肛拭采用Real-Time PCR法检测结果显示，肠道病毒通用型（EV）阳性20例，肠道病毒71型（EV71）阳性114例，肠道病毒柯萨奇A组16型（COXA16）阳性4例，阳性率分别为9.17%（20/218）、52.29%（114/218）和1.83%(4/218)。

2.2 年龄分布

表1 不同年龄段患儿手足口病核酸检测情况

（注：EV是指除EV71和COXA16以外的肠道病毒）

218例受检者中，3岁以下年龄段患儿193例，占总患儿数的88.48%（193/218）。1~2岁年龄段的患儿较多，阳性数分别占总患儿的35.78%（78／218）和16.06%（35／218）；而0~1和3~4年龄段患儿阳性数均为12例，各占5.5%（12／218）。

2.3 性别构成

表2 不同性别患儿手足口病核酸检测情况

218份病例样本中，男性为126例，阳性率为62.70%（79/126）；女性为92例，阳性率为64.13%（59/92）；男女比例为1.36:1。男性重症病例明显高于女性，与报道相符[1]。这可能是男孩子普遍生性好动，与外界接触较多，且卫生行为习惯较差，增加了接触感染的机会，但病原阳性检出率男女无明显差异。

2.4 区域分布

从218份病例样本的病例居住地看，城区为43例，阳性率为79.07%（34∕43）；农村为175例，阳性率为59.43%（104∕175）。城区患儿比农村患儿病原阳性检出率高，其原因与城市人口密度大，儿童入园率高，儿童集居生活和密切接触以及城镇居民健康意识较强，入院就诊及时，医疗资源集中方便有关。

表3 城区与农村患儿手足口病核酸检测情况

2.5 时间分布

2011年1~2月该市报告手足口病重症病例人数较少；3月份开始逐月增多，至5~6月达到重症报告病例高峰，7月份重症报告病例急剧下降， 8月份以后重症报告病例人数逐月减少。结果见图1。

图1 重症报告病例时间分布情况

3 讨论

手足口病是由肠道病毒引起的以发热伴手、足皮肤和口腔黏膜疱疹、斑丘疹为主要症状的急性感染性疾病，是严重危害儿童健康的主要传染病之一。我国于1981年在上海首次报道该病；以后许多省份均有报道。近年来，手足口病发病率显著上升，并呈现出季节性流行和全年散发趋势。

本次218例临床疑似重症手足口病样本病原学检测结果显示：有52.29%（114∕218）的病例检出Ev71病毒阳性，这与李苑等[2]的研究结果一致，表明本市2011年手足口病引起重症病例的病毒株是Ev71型为主。与COXA16相比，感染EV71更容易出现严重并发症, 因此要特别加强对EV71引起的有中枢神经系统并发症的重症病例的监测,提前落实抢救措施, 防止病情恶化导致死亡[3]。

从218例重症患儿样本中得出，重症发病年龄集中在5岁以下。尤其是3岁以下儿童重症病例报告发病数为193例，占总病例报告数的82.61%；且EV71型阳性检出93例，分别占阳性标本总数和Ev71阳性数的67.39%（93∕138）和81.58（93∕114）。据健康人群血清流行病学研究表明, 新生儿由于携带母亲血清抗体, 约44%的新生儿具有EV71 抗体, 但出生1 个月后会迅速下降, 1~ 23 月龄的婴幼儿EV71 抗体阳性率仅为0. 8% ；从2~ 5 岁开始血清EV71 抗体阳性率以每年12%速度增高, 15 岁以上人群抗体阳性率都保持在50%以上[4]。说明手足口病的发生与免疫功能有关，3岁以下年龄段的儿童免疫力低下，5岁后免疫功能逐渐完善，6~7岁接近成人水平[5]。所以手足口病发病集中在5岁以下儿童的情况表明，其发生与儿童免疫功能有关，提示防治手足口病工作重点是幼托儿童。

手足口病传染性强，传播速度快，对5 岁以下儿童危害严重，至今尚无疫苗预防，亦无特异性治疗方法[6]，在这种情况下，必须做好重点场所、重点人群、重点季节的手足口病防控工作，加强对手足口病重症病例早期临床表现的发现与识别，提高家长和医务人员的认识水平，使具有重症病例早期指征的患儿及早就诊救治，避免因延误病情演变成危重病症，甚至导致死亡[7]。

[1] 朱渭萍，诸强，王勇，等.上海市浦东新区2005-2007年手足口疫情监测分析[J].上海预防医学，2008，20(8)：372-374.

[2] 李苑，詹志强，余光清，等，深圳市宝安区2006-2009年手足口病聚集性病例流行病学分析[J].热带医学杂志,2010,10(10):1234-1236.

[3] 杨洪,何雅青, 张海龙，等.2009 年深圳市手足口病病原学监测[J].中华疾病控制杂志，2011,15(12):1051-1053.

[4] Ooi E E, Phoon M C, Ishak B, et al. Seroepidemiology of humanenterovirus 71, Singapore [J] . Emerg Infect Dis, 2002, 8(9) :995-997.

[5] 胡亚美，江载芳，诸福棠，实用儿科学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2003:566-568.

[6] 王连森，毕振强，房玉英，等. 2008 年山东省手足口病流行病学分析[J]. 山东医药,2009,49(19) : 45-46.

[7] 李艳清,孙立梅,张正敏,等.256例感染其他肠道病毒的手足口病病例临床特点及就诊情况分析［J］.华南预防医学,2010,36⑶:36-38.

ETIOLOGY DETECTION OF 218 CASES WITH SUSPECTED SEVERE HAND-FOOT-MOUTH DISEASE OF YICHUN CITY IN 2011

*LU Hong-yun, ZHU Xiao-jing, ZHONG Ling, HUANG Qiu-yan, XIE Hai-zhen, WANG Qian

(Yichun Centre for Disease Control and Prevention, Yichun, Jiangxi 336000, China)

: To provide reference materials about prevention and control of hand-foot-and-mouth disease in the region, suspected severe cases of hand-foot-and-mouth disease from several hospitals of Yichun in 2011 were tested.: The enter virus including EV71, COX16, and the popular type (EV) in throat swabbing, anal swabbing, secretion of herpes and sewage collected from suspected cases were detected by using real-time RT-PCR.: There are 114 cases of EV71 positive, 4 of COX16 positive, and 20 of EV positive in 218 cases. The positive percent respectively are 52.29%, 1.83% and 9.17%. The male cases are much more than female (1.38:1), the majority are aged from 1 to 2, and the month which contains serious cases is from April to June in this year.: Through the laboratory results, it could be concluded that EV71 is the main virus strain that resulted in the hand-foot-and-mouth disease in this area this year, and is the main pathogen of severe and grave cases.

hand-foot-and-mouth disease; EV71; COX16

R512.5

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2012.04.023

1674-8085(2012)04-0093-03

2012-03-10;

2012-04-26

*陆红云(1961-），女，江西宜春人，主管技师，主要从事流感病毒分离及培养(E-mail:luhy2009yc@126.com);

祝晓静(1963-），女，江西宜春人，主管技师，主要从事病毒核酸检测(E-mail:zhuxiaojing1963@163.com);

钟 玲(1964-），女，江西宜春人，主管技师，主要从事病毒核酸检测(E-mail:zhongling64@126.com);

黄秋艳(1965-），女，江西宜春人，主管技师，主要从事病毒核酸检测(E-mail:Hqy1965@gina.com.cn);

谢海珍(1976-），女，江西宜春人，主管技师，主要从事病毒核酸检测(E-mail:xiehzh76@163.com);

王 倩(1989-），女，江西宜春人，主管技师，主要从事流感病毒分离及培养(E-mail:wangqian89@126.com).