王家敏 ，平 玲 ，沈武玲 ，徐水林 ，魏园园 ，马忠仁 ，乔自林

（1.甘肃省动物细胞工程技术研究中心，甘肃兰州730030；2.西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730030；3.兰州民海生物工程有限公司，甘肃兰州730010）

MDCK细胞系（Madin-Darby canine kidney cells）是从犬肾组织中分离培养获得的上皮样贴壁细胞，该细胞系可连续传代[1]。MDCK细胞系可以用于多种病毒的繁殖和纯化，如禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）、呼肠孤病毒（Reovius）、腺病毒（Adenovirus）、犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV）、猫粒细胞缺乏症病毒（Feline panleukopenia virus，FPLV）等。近年来，大量研究表明，MDCK细胞系可以替代鸡胚用于流感及禽流感病毒的监测、研究及其疫苗生产[2-5]。

本研究从ATCC，CCTCC，北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系，建立相应的细胞库，并对引进细胞系的基本生物学特性进行了研究，旨在为开展MDCK细胞及流感细胞基质疫苗的研究提供基础理论依据和细胞资源。

1 材料和方法

1.1 材料

供试仪器：CKX41型荧光倒置相差显微镜（Olympus），CX21型普通显微镜（Olympus），液氮罐，超净工作台，CKX40-32PH型倒置相差显微镜（Olympus），3110 型 CO2培养箱（Thermo）。

试验材料：胎牛血清（兰州民海），DMEM（Gibco），胰蛋白酶（Gibco），DMSO（Thermofisher），TSB（DIFCO），THIO（DIFCO），秋水仙素（Sirius进口分装），脂质体（LipofectamineTM2000，invitrogen），红色荧光蛋白质粒（pDsRedMonomer-N1，Clontech），Hoechst33258（Sigma）等。

1.2 方法

1.2.1 细胞引进及细胞库的建立 分别从ATCC（购买）、CCTCC（购买）、北京协和细胞资源中心（购买）及某企业（赠送）引进4株MDCK细胞系，扩增培养后冻存，分别建立种子细胞库和工作细胞库。

1.2.2 生物学特性研究

1.2.2.1 复苏细胞 从液氮罐中取出冻存管，按照常规方法复苏细胞，2 h后换加等量的新鲜完全培养基，降低DMSO对细胞的损伤[6]。

1.2.2.2 活力检测 完成细胞复苏后，取少量细胞悬液，运用台盼蓝染色法进行细胞活力测定[7]。……