林 仁 王 玮 朱元贵 赵小贞△

1（福建医科大学 人体解剖学与组织胚胎学系，福州 350122）

2（福建医科大学 附属协和医院老年病研究所，福州 350001）

阿尔茨海默病是常见的中枢神经退行性疾病，老年斑是其的重要病理征之一［1－3］。本实验采用七月龄雌性转基因小鼠模型，分别应用Aβ免疫组织化学染色法与改良Bielshowsky镀银染色法观察小鼠大脑皮质第一运动区（primary motor cortex，M1）、大脑皮质第二运动区（secondary motor cortex，M2）、齿状回（gyrus dentatus，GD）、海马CA1区（field CA1of hippocampus，CA1）、海马CA3 区（field CA3of hippocampus，CA3），尾壳核（caudate putamen nucleus，CPu）以及小脑（cerebellum，Cb）等七个脑区老年斑的分布，以期探讨二种方法检测老年斑的可靠性。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

七月龄阿尔茨海默病转基因雌性小鼠7只（体质量：40±3g，由美国Mary Jo Ladu教授惠赠），其中野生型小鼠3只，突变型4只。

1.2 Morris水迷宫检测学习记忆能力

实验历时6天，记录从进入水中到找到平台的时间定为逃避潜伏期，取四个象限逃避潜伏期均值作为平均逃避潜伏期，进入水中后搜索平台的路径定为搜索策略。

1.3 实验鼠处理

小鼠经灌注取脑、石蜡包埋，进行5μm 与10 μm 交替连续冠状切片，10张5μm 和5张10μm 计为一个模块，共3模块。5μm 切片备做酶免疫组织化学染色，10μm 切片备做改良Bielshowsky镀银染色。

1.4 酶免疫组织化学染色

具体步骤参照迈新生物科技公司UltraSensitiveTM S－P超敏试剂盒说明书。一抗：兔抗Aβ（北京博奥森生物技术有限公司），加PBS 1∶400稀释。阴性片以PBS代替一抗。

1.5 改良Bielshowsky镀银染色

切片常规脱蜡脱水，经3%硝酸银水溶液、10%甲醛水溶液、氨银乙醇液、8%甲醛水溶液后5%硫代硫酸钠液固定，脱水透明，中性树胶封片。

1.6 体视学计量

应用每小格1.5×1.5的测试网格计数阳性物数量。……