韩中保 李荣良 韩扣兰

（盐城卫生职业技术学院，盐城 224005）

间充质干细胞（MSC）是属于中胚层的一类多能干细胞，具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞、肝脏细胞和神经细胞等多种细胞分化的能力，可来源于骨髓、脐带、皮肤、肺脏等多处组织器官。骨髓MSC还参与构成造血干细胞生存和分化的微环境，自体获取的骨髓MSC 回输后不发生免疫排斥反应，体外基因转染率高，但骨髓中MSC 的含量非常少。黄芪具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效。黄芪多糖是黄芪主要成份之一，具有全方位的免疫调节和改善骨髓造血等作用。为了探讨其对间充质干细胞的影响，我们通过体内、体外实验研究了黄芪多糖注射液对MSC增殖的影响。

1 材料与方法

1.1 动物及试剂

选取2月龄体重200～250g健康SD 大鼠30只，雌雄兼用（上海斯莱克实验动物有限公司）；淋巴细胞分离液（天津TDB 生物有限公司）；LDMEM、胰蛋白酶（美国GIBCO 公司）；活细胞计数（CCK－8）试剂盒（日本株式会社同仁化学研究所）；5－溴尿嘧啶核苷（Brdu）（Sigma公司）；黄芪多糖注射液（250mg／瓶，天津赛诺制药有限公司）；生物素山羊抗大鼠IgG（博士德二抗试剂盒）；DAB 显色剂（博士德生物工程有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养 取2只SD 大鼠的股骨和胫骨，用DMEM 冲出骨髓。将冲出的骨髓和DMEM 混合液离心（1.5×103r／min）5min，去上清液后，用DMEM 制成悬液。用吸管沿管壁将悬液慢慢加入已装有4ml分离液的离心管中，使两种溶液间有明显的界面，1.9×103r／min水平离心20min。用吸管小心吸取中层白色雾状的细胞层，无血清DMEM 液洗涤两次，然后用含15%小牛血清的DMEM 培养液重悬，5×105／ml接种，37℃、5%CO2孵箱培养。……