李灿宇，申爱荣，张自森，封全灵，吴 敏

(1.郑州大学第三附属医院妇产科，河南郑州450052;2.郑州大学第五附属医院肿瘤科，河南 郑州450052)

Hedgehog信号通路是人类胚胎发育过程中调控细胞增殖和组织分化的重要信号通路。近年来的研究发现，其异常激活能导致肺癌、消化道肿瘤、前列腺癌等多种肿瘤的发生［1－2］。神经胶质瘤相关基因同源蛋白(glioma-associated oncogene homolog，GLI)是 Hedgehog信号通路末端的转录调控因子，具有很强的转录激活功能。目前国内外有关SHH、GLI1在宫颈癌中的研究报道较少。本研究用免疫组化方法检测了Hedgehog信号通路中SHH、GLI1蛋白在宫颈癌前病变和早期宫颈癌组织中的表达情况，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 取2008年2月至2011年5月经病理证实的早期宫颈癌患者36例、CINⅢ级28例、正常宫颈20例作为研究对象。所有标本经体积分数10%甲醛固定，石蜡包埋，切片。根据FIGO分期，36例宫颈癌中Ⅰa期10例，Ⅰb期20例，Ⅱa期6例;组织类型均为鳞癌;细胞分化程度:Ⅰ级2例，Ⅱ级10例，Ⅲ级24例;有淋巴结转移6例，无淋巴结转移30例。宫颈癌患者年龄28～65岁，中位年龄48岁。

1.2 免疫组化检测方法 所有组织均用体积分数10%甲醛固定，常规石蜡包埋后连续切片、HE染色。兔抗人SHH单克隆抗体、兔抗人GLI1多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，稀释度为1∶100。免疫组化采用S-P法，枸橼酸钠溶液内微波修复，一抗4℃过夜，二氨基联苯胺(DAB)显色，每组均设PBS做阴性对照。

1.3 结果判定 以细胞膜或细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性。结果判断根据阳性细胞所占的比例及显色程度，400倍光学显微镜下计数5个视野或1 000个细胞做半定量分析。按染色强度分为:无着色为0分，浅着色为1分，中等着色为2分，强着色为3分。按阳性细胞所占比例分为:无阳性细胞为0分，≤25%为1分，＞25% ～50%为2分，＞50%为3分。染色强度和阳性细胞所占比例得分相乘为最后得分:＜2分为阴性(－)，2～3分(+)，4～6分(++)，＞6分(+++)。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0进行统计学分析，率的比较采用χ2检验或Fisher确切概率法，检验水准α =0.05。

2 结果

2.1 SHH和GLI1蛋白在不同宫颈组织中的表达SHH蛋白阳性表达率分别为正常宫颈组织20.0%(4/20)、宫颈 CIN Ⅲ 60.7%(17/28)、早期宫颈癌69.4%(25/36)，两两比较差异有统计学意义(P均＜0.05)。SHH蛋白在正常宫颈、宫颈CINⅢ和早期宫颈癌组织中的平均表达强度分别为 1.254±0.286、3.453 ±0.563和4.674 ±0.598，两两比较差异有统计学意义(P均＜0.05)。GLI1蛋白阳性表达率分别为正常宫颈组织 25.0%(5/20)、宫颈 CIN Ⅲ 53.6%(15/28)、早期宫颈癌58.3%(21/36)，两两比较差异有统计学意义(P均＜0.05)。GLI1蛋白在正常宫颈、宫颈CINⅢ和早期宫颈癌组织中的平均表达强度分别为0.452 ±0.162、1.874 ±0.368 和 3.752 ± 0.840，两两比较差异有统计学意义(P均＜0.05)。见表1。

表1 SHH和GLI1蛋白在不同宫颈组织中的表达 例

2.2 SHH和GLI1蛋白的表达与早期宫颈癌临床病理参数的关系 SHH和GLI1蛋白的表达与早期宫颈癌患者年龄、FIGO分期、淋巴结转移、病理分级均无关(P 均 ＞0.05)。见表2。

表2 SHH和GLI1蛋白的表达与早期宫颈癌临床病理参数的关系 例

3 讨论

Hedgehog基因是在1980年筛选果蝇胚胎发育基因时首次被鉴定的。在哺乳动物中共有3个Hedgehog同源体，分别是SHH、IHH和DHH。SHH基因位于7q36，所编码的分泌蛋白与生长发育密切相关的信号转导因子。Hedgehog信号通路在脊椎动物的胚胎发育过程中具有非常重要的作用。

GLI1是Hedgehog信号传导通路的关键基因，Hedgehog信号激活后通过其进入细胞核中启动靶基因的转录，是Hedgehog信号传导的主要通路之一。越来越多的研究［1－5］显示，Hedgehog信号通路与肿瘤的发生发展有着密切的关联。祝芳等［1］研究发现SHH及GLI1随胃癌恶性程度增高、TNM临床分期升高而表达强度升高，且伴有淋巴结转移及远处转移者表达强度升高，胃癌患者生存期随着SHH及GLI1表达强度的升高而缩短。

有研究［6］报道宫颈癌组织中也明显存在Hedgehog信号通路的异常活化，SHH的过表达与HPV16型感染密切相关。本研究也发现早期宫颈癌及其癌前病变组织中的SHH和GLI1蛋白均存在过度表达，与国内外报道一致［7］。但检测到的阳性表达率低于国内同类报道，这可能与病例选择有关。本组患者的SHH和GLI1蛋白的表达均与年龄、FIGO分期、淋巴结转移、病理分级无关，与文献报道一致［2］。这些提示SHH信号途径可能在宫颈癌发生发展过程中起重要作用。

本研究结果还显示，GLI1蛋白的阳性表达率低于SHH蛋白，这说明GLI1的基因和蛋白的表达可能受到其他转录调节因子的影响。最新研究［8］就发现Zic2可作为GLI1转录表达的一个调节因子，可协同增强GLI1在宫颈癌细胞核中的保留进而调节其癌基因活性。目前以Hedgehog信号通路为治疗靶点的研究也日趋增多，Yanai等［9］发现Hedgehog信号通路可能是有淋巴结转移的低分化胃癌潜在治疗靶点。针对Hedgehog信号传导通路的SMO受体的治疗可能改善胰腺癌的预后［10］。

综上所述，本研究发现SHH、GLI1在宫颈癌前病变和早期宫颈癌组织中呈现过度表达，其信号通路可能参与了宫颈癌的发生发展，两者的检测有助于宫颈癌早期诊断。

［1］祝芳，杜国能，陈剑辉，等.Sonic hedgehog信号通路中Shh蛋白及其下游转录因子Glil在胃癌组织中的表达及意义［J］.中华实验外科杂志，2011，28(6):941 －943.

［2］胡伟国，熊炯邤，王春友，等.胚胎发育信号通路Sonic hedgehog在胰腺癌组织中的表达及意义［J］.中华肝胆外科杂志，2009，15(5):368－370.

［3］Katoh Y，Katoh M.Hedgehog target genes:mechanisms of carcinogenesis induced by aberrant hedgehog signaling activation［J］.Curr Mol Med，2009，9(7):873 －886.

［4］郭丽梅，林梅，张燕，等.Shh在大肠腺瘤及大肠癌中的表达与意义［J］.肿瘤基础与临床，2009，22(3):185 －188.

［5］Medina V，Calvo MB，Díaz-Prado S，et al.Review:Hedgehog signalling as a target in cancer stem cells［J］.Clin Transl Oncol，2009，11(4):199－207.

［6］玄延花，李贵铃，姜宏宇，等.子宫颈癌中Hedgehog信号通路蛋白表达与人乳头状瘤病毒16型感染的关系［J］.中华病理学杂志，2009，38(3):178 －182.

［7］Xuan YH，Jung HS，Choi YL，et al.Enhanced expression of hedgehog signaling molecules in squamous cell carcinoma of uterine cervix and its precursor lesions［J］.Mod Pathol，2006，19(8):1139－1147.

［8］Chan DW，Liu VW，Leung LY，et al.Zic2 synergistically enhances Hedgehog signalling through nuclear retention of Gli1 in cervical cancer cells［J］.J Pathol，2011，225(4):525 －534.

［9］Yanai K，Nagai S，Wada J，et al.Hedgehog signaling pathway is a possible therapeutic target for gastric cancer［J］.J Surg Oncol，2007，95(1):55 －62.

［10］Kelleher FC.Hedgehog signaling and therapeutics in pancreatic cancer［J］.Carcinogenesis，2011，32(4):445 －451.