孙启强，兰 斌，陈彦超

(福建医科大学附属第一医院胃肠外科，福建福州350005)

胃癌是消化系统最常见的肿瘤之一，随着居民饮食结构、生活环境的改变及诊断水平的提高，其检出率有逐年升高的趋势。增殖细胞核抗原67(proliferating cell nuclear antigen 67，Ki-67)和胸苷激酶1(thymidine kinase 1，TK1)在多种肿瘤组织中都有表达，两者与肿瘤的发生、进展等生物学行为均有密切关系，本文通过对胃癌、正常胃组织中两者表达的比较研究，探讨两者在胃癌发生、发展过程中的作用及相互关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取福建医科大学附属第一医院2009年至2011年手术切除、术后病理证实为胃癌的标本71例，其中男性53例，女性18例;平均年龄61岁;全部患者术前均未接受过放化疗。组织学分型:高、中分化腺癌30例，低、未分化腺癌41例;浸润深度:黏膜层及肌层23例，达到或穿透浆膜层48例;有淋巴结转移42例，无淋巴结转移29例;TNM分期:Ⅰ、Ⅱ期19例，Ⅲ、Ⅳ期52例。另随机抽取门诊胃镜检查正常胃组织标本20例作为对照组。

1.2 主要试剂 TK1鼠抗人单克隆抗体，克隆号F12，稀释度1∶400，购自 Abnova 公司;Ki-67，鼠抗人单克隆抗体，克隆号MB1，稀释度1∶200，购自中山金桥公司;二抗(Envision 2步法鼠/兔通用型试剂盒k5007)均购自中山金桥公司。

1.3 实验方法 将以上病例参照相关文献步骤［1］，进行组织免疫组化染色，相同病例做平行标本2例，并设置阴性对照。切片厚度4 μm备用。免疫组化采用Envision 2步法，以枸橼酸钠(pH 6.0)为修复液，高压锅抗原热修复，高压保持2 min;其余步骤按常规Envision法进行，DAB显色，苏木精复染。用PBS代替一抗设立空白对照。

1.4 结果判定 TK1为细胞质着色，Ki-67为细胞核着色。

1.5 统计学处理 应用SPPS 13.0进行统计处理，各组间计数资料的比较采用 χ2检验，相关分析采用Spearman分析，检验水准 α=0.05。

2 结果

2.1 胃癌组织、正常胃组织中Ki-67和TK1的表达两者在胃癌组织中的表达水平明显高于正常胃组织，差异有统计学意义(P均＜0.05)。Ki-67阳性染色位于细胞核中，TK1阳性染色位于细胞质中。见表1，图1、2。

2.2 Ki-67和TK1的表达与胃癌各临床病理参数的关系 Ki-67和TK1的表达与胃癌的病理分级无关(P＞0.05);Ki-67的表达与胃癌的肿瘤浸润程度、淋巴结转移以及TNM分期有关(P均＜0.05);TK1的表达与胃癌的肿瘤浸润程度、淋巴结转移以及TNM分期无关(P均 ＞0.05)。见表2。

2.3 胃癌组织中 TK1与 Ki-67表达的关系Spearman相关分析显示，胃癌组织中TK1与Ki-67的表达呈正相关关系(r=0.383，P=0.001)。见表3。

表1 Ki-67和TK1在胃癌组织和正常胃组织中的表达

3 讨论

胃癌在我国是最常见的恶性肿瘤之一，死亡率居恶性肿瘤首位。胃癌多见于男性，男女之比约为2∶1。平均死亡年龄为61.1岁。胃癌细胞的增殖、分裂失调是肿瘤发生的基础，观测细胞增殖强度和指数有助于评估肿瘤的性质。TK1作为研究细胞增殖程度的新的标志物，其与Ki-67的细胞增殖周期特征不同，主要在S期表达并定位于细胞质，而Ki-67表达于除G0期外的各期。TK1是一种特殊激酶，催化胸苷转变为一磷酸胸苷酸，是癌变细胞DNA合成必须的前体物。在细胞增殖过程中，其催化脱氧核糖尿嘧啶核苷合成单磷酸脱氧核糖尿嘧啶核苷，然后在其他相关磷酸激酶的作用下，合成三磷酸脱氧核糖尿嘧啶核苷，参与DNA合成［2］。Morimoto等［3］对肝脏部分切除后大鼠血清TK1进行检测，发现在大鼠手术恢复期，其肝脏TK1活性明显增高，从而证实其在细胞增殖过程中的作用。TK的2种同工酶TK1、TK2分别定位于细胞质和细胞核。增殖周期中的TK1含量自细胞分裂G1期合成开始增加，在S期逐渐升高，至G2期达到最高［4］。胃癌的发生就是正常胃黏膜在各种损伤因子的作用下，导致黏膜活性大大增强。因此，通过检测血清TK1和正常胃黏膜上皮细胞的细胞质内TK1含量和表达强度，就有可能为判断胃癌黏膜内上皮细胞从良性到恶性变化、从量变到质变的过程和状态提供了依据。

表2 Ki-67、TK1在胃癌组织中的表达与临床病理参数的关系

表3 Ki-67、TK1在胃癌组织中表达的相关性

TK1在血清学的检测中应用广泛，且相关报道较多［5］，但其免疫组化方面的研究尚较少。本文应用免疫组化方法检测71例胃癌、20正常胃黏膜组织中的TK1及Ki-67的表达，进而研究TK1在胃癌发生、发展过程中的作用及TK1与Ki-67两者之间的相关性;同时研究TK1在评价患者预后中的作用。结果显示，胃癌组织中TK1的阳性表达率明显高于正常胃组织，提示过表达的TK1可能与胃黏膜过度增殖和恶性转化有关;对TK1的表达情况与胃癌的各临床病理参数的关系进行分析，发现TK1表达与胃癌的病理分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期无关，提示TK1的过量表达与胃癌发生有关，但对于判断其进展及预后意义不明显，这有助于早期发现胃癌。这与相关文献报道TK1在大肠癌中的检测结果一致［6］。

Ki-67是一种与细胞周期有关的蛋白质，Ki-67是目前多种恶性肿瘤尤其是乳腺癌研究中的生物指标，在其他肿瘤检测中也常应用［7］，可以通过Ki-67的检测，了解恶性肿瘤的细胞增殖活性。Ki-67高表达与肿瘤发生、发展有重要关系，Ki-67的表达与胃癌的病理分级、浸润深度、有无淋巴结转移及TNM分期关系密切。本研究发现，Ki-67在胃癌组织中的表达显著高于正常胃组织，达到或穿透浆膜层者高于侵犯黏膜层和肌层，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期者高于Ⅰ、Ⅱ期者，提示在胃癌组织中，病理分化越差，细胞恶性程度越高;病程越晚，增生越活跃，则Ki-67表达水平越高。Ki-67在某些良、恶性疾病间的表达有一些交叉，有些良性病变的 Ki-67指数甚至高于某些恶性病变［8］，因此单独依靠 Ki-67来鉴别这些疾病时应慎重。TK1和Ki-67在增殖指数及其与临床病理参数的关系方面表现出共同的特征，但相对于Ki-67而言，TK1在腺癌中是一种更可靠的增殖相关标志物。因此可以通过联合检测TK1和Ki-67来观测肿瘤的增殖程度、生物学性质以及辅助病理学诊断。另外在方法学检测的优势上，TK1表现出细胞质定位特征的免疫组化原位检测要比其他检测方法更精准［9］。

［1］张毅敏，单绿虎，徐笑红.细胞质胸苷激酶1在106例肿瘤病人的表达［J］.中国肿瘤，2008，17(3):247 －248.

［2］Zhang F，Li H，Pendleton AR，et al.Thymidine kinase 1 immunoassay:a potential marker for breast cancer T［J］.Cancer Detect Prev，2001，25(1):8 －15.

［3］Morimoto M，Numata K，Tanaka K.Rat peripheral mononuclear cell thymidine kinase activity increases during liver regenerative processes after partial hepatectomy［J］.J Gastroenterol Hepatol，1995，10(6):655－661.

［4］He Q，Skog S，Wang N，et al.Characterization of a peptide antibody against a C-terminal part of human and mouse cytosolic thymidine kinase，which is a marker for cell proliferation［J］.Eur J Cell Biol，1996，70(2):117 －124.

［5］Brockenbrough JS，Rasey JS，Grierson JR，et al.A simple quantitative assay for the activity of thymidine kinase 1 in solid tumors［J］.Nucl Med Biol，2007，34(6):619 －623.

［6］吴鸿雁，樊祥山，孟凡青，等.TK1、Ki-67在大肠癌发生发展中作用及其相关性［J］.临床与实验病理学杂志，2009，25(3):282－286

［7］Mao Y，Wu J，Wang N，et al.A comparative study:immunohistochemical detection of cytosolic thymidine kinase and proliferating cell nuclear antigen in breast cancer［J］.Cancer Invest，2002，20(7/8):922－931.

［8］Mao Y，Wu J，Skog S，et al.Expression of cell proliferating genes in patients with non-small cell lung cancer by immunohistochemistry and cDNA profiling［J］.Oncol Rep，2005，13(5):837 －846.

［9］Zhang F，Shao X，Li H，et al.A monoclonal antibody specific for human thymidine kinase 1［J］.Hybridoma，2001，20(1):25 －34.