王晓多 王晓理

[摘要]目的 获得能用于中药太子参简单序列重复区间DNA标记技术等分析研究的高质量DNA。 方法 以太子参为材料，采用改良CTAB法提取太子参DNA，经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测。 结果 改良的CTAB法能获得高质量的太子参DNA，OD260/OD280＞1.8，蛋白质、多糖、RNA等去除较彻底，适于简单序列重复区间分析。 结论 改良的CTAB法所提取太子参DNA适于简单序列重复区间分析。

[关键词] 太子参；DNA；OD值

[中图分类号] R284.2???[文献标识码] B???[文章编号] 2095-0616（2012）15-56-02

An extraction method of genome DNA from Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm. scape for ISSR analysis

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1.Huaxi Agricultural Bureau of Guiyang City, Guiyang 550025,China;2.Wudang Agricultural Technique Service Center of Guiyang City,Guiyang 550018,China

[Abstract] Objective To extract high quality DNA from Pseudostellaria heterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.for ISSR and other molecular biological analysis. Methods It was examined with ultraviolet spectrophotometer and agarose electrophoresis that the DNA was extractied by improved CTAB. Results The improved CTAB method was used to extract DNA. The purity of the extracted DNA was very high with OD260/OD280 values ＞1.8.The protein,polyhexose and RNAwere elminated completely. Conclusion The improved CTAB method was suitable for extracting DNA from Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.for ISSR analysis.

[Key words] Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.;DNA;OD value

简单序列重复区间（ISSR）分子标记技术具有多态性高，可重复性和稳定性好的特点[1]。为了构建太子参[Pseudostellaria heterophylla（Miq.）Pax ex Pax et Hoffm.]ISSR分子标记，首先，必须从太子参中提取到高质量的DNA。本试验以新鲜太子参为材料，避免DNA分子的降解，采用改良CTAB法提取太子参基因组DNA，能够除去多糖及酚类杂质，获得纯度和产率可以用于ISSR分析的DNA。

1?材料与方法

1.1?供试材料

太子参（PseudosteUaria heterophylla）新鲜块根，由贵阳医学院生药研究室采集并鉴定。

1.2?试剂试液

CTAB（十六烷基三甲基溴化铵），SDS（十二烷基磺酸钠），琼脂糖，溴化乙锭（EB），RNase；CTAB提取缓冲液（2 g/100 mL CTAB，1.4 mol/L NaC1，20 mmol/L EDTA，100 mmol/L Tris·C1，pH 8.0）

1.3?主要仪器

低温高速离心机（Beckman GS）；紫外/可见分光光度计（上海分析仪器厂）；凝胶成像仪（UVPGDS7600G）；稳压稳流电泳仪（北京六一仪器厂DYY28B型）。

2?方法

2.1?太子参基因组DNA的提取采用改进的CTAB法[2]

（1）取供试材料，用重蒸水洗净，加入液氮迅速研磨成粉末。将粉末移至1.5 mL的离心管中，加入700μL己预热（65℃）的CTAB裂解缓冲液，混匀后置于65℃水浴1.5 h，期间轻摇几次。

（2）水浴完成后，冷至室温，加入等体积氯仿/异戊醇（24︰1，V/V），反复颠倒数次混合，13 000 r/min，离心10 min。取上清液转至另一离心管中，再加入等体积氯仿/异戊醇（24︰1，V/V），轻轻混匀，13 000 r/min，离心10 min，上清加2/3倍体积异丙醇（预冷），混匀，可见絮状DNA。……