徐莉娟，代丽萍，王凯娟，张建营，王 鹏#

1)郑州大学公共卫生学院流行病学教研室 郑州 450001

2)郑州大学第一附属医院检验科 郑州 450052

乳癌是全世界范围内中年女性最常见的恶性肿瘤，发病率为10% ～15%[1]。近年来我国乳癌的发病率明显上升，从20世纪90年代初期已居女性恶性肿瘤之首。乳癌的发病以40～60岁的女性最为多见，近年来40岁以下的发病率逐渐升高。早期诊断是乳癌二级预防的核心内容。乳腺位于体表，癌肿易通过患者自查以及各种检查手段如红外线扫描、数字X线检查、B超检查和磁共振成像扫描以及细针穿刺活检等发现，使乳癌比其他肿瘤更易早期诊断。除此之外，肿瘤标志物[2]检测亦是目前早期诊断乳癌常用的方法之一。乳癌抗原(CA153)、癌胚抗原(CEA)等已被认为是有价值的指标，但实际应用中单项指标的准确性并不理想。作者联合检测乳癌患者血清中多种肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)抗体的表达，探讨TAA联合检测在乳癌早期诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 标本来源 115例乳癌患者血清标本均由郑州大学第一附属医院检验科提供(为到该院就诊、经组织病理学确诊的乳癌患者)，153例正常人血清标本均采集自到该院进行健康体检并证实无任何肿瘤相关疾患的健康成人。

1.2 主要试剂和仪器 14种TAA(CyclinE，CDK2，CyclinB1，CyclinD1，p16，p62，Imp1，Koc，cIAP，Survivin，p53，Calnuc，C-myc，RalA)为美国德克萨斯州大学生命科学系肿瘤免疫和肿瘤分子流行病学研究室提供，96孔酶标板(美国 Gibco公司)，SUNRISE酶标仪(美国Tecan公司)。

1.3 血清中TAA抗体抗原的检测及结果判定采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)[3]:各种抗原以0.5 g/L的稀释度包被96孔板;一抗均按1∶100稀释，PBS作为空白对照，每孔加100 μL，37℃孵育2 h，PBST洗板3次;二抗 HRP标记的羊抗人 IgG(H+L)1∶4000 稀释，每孔100 μL，37 ℃孵育2 h，洗板3次;DAB显色液每孔100 μL，37℃避光反应至充分显色;终止液50 μL，在酶标仪上读取波长450 nm处的OD值，空白孔调零。结果判定:每份样品血清做3孔，取平均值判断结果，空白孔调零;选择5个乳癌患者血清和5个正常人血清作为判断每批ELISA试验之间可靠性的指标;所有检测的正常人血清OD值的平均值加2个标准差为判断临界值[4]，高于此值为阳性，低于此值为阴性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0进行分析，应用χ2检验或四格表确切概率法处理数据，检验水准α =0.05。

2 结果

2.1 每种TAA抗体检测结果及真实性评价 见表1。由表1可见，单个TAA检测乳癌患者血清时，乳癌组与正常组TAA检出的阳性率差异均有统计学意义(P ＜0.05)，检测的灵敏度13.0% ～32.2%，其中CyclinE抗体的阳性率(32.2%)最高，Calnuc抗体的阳性率(13.0%)最低;正常人抗体阳性率较低，CyclinB1抗体的阳性率(3.9%)最高，cIAP抗体的阳性率(0.7%)最低。

2.2 不同TAA抗体组合的检测结果 并联试验诊断结果见表2。

表1 每种TAA抗体检测结果及真实性评价

表2 不同TAA抗体组合的检测结果

由表2可见，随着抗原种类的增加，检测的灵敏度逐渐增加，当增加到8种抗原时，继续增加抗原种类，不能提高检测的灵敏度，反而降低特异度。因此，从14种抗原中筛选出8种抗原的并联组合(Cyclin E，Koc，Imp1，cIAP，p62，p16，Cyclin B1 和Calnuc)为最佳组合，8种抗原联合检测的灵敏度从32.2%增加到72.2%，比单个抗原增加了40%，特异度仅从98.0%降低到91.5%，约登指数为0.637，阳性预测值为86.5%，阴性预测值为81.4%。

2.3 最佳组合检测乳癌的评价 见表3。筛选出的8种TAA联合检测时，乳癌患者血清中TAA抗体阳性率明显高于正常人群血清，差异具有统计学意义(χ2=115.796，P ＜0.001)，提示8 种 TAA 联合检测乳癌的临床诊断价值较高，诊断结果与真实值之间中度一致[真实性评价:灵敏度=72.2%，特异度=91.5%，约登指数=0.637，阳性似然比=灵敏度/(1－特异度)=8.490，阴性似然比=(1－灵敏度)/特异度 =0.304，一致率 =83.2%，Kappa=0.650，阳性预测值 =86.5%，阴性预测值 =81.4%]。

表3 最佳组合检测乳癌结果 例

3 讨论

既往研究[5-6]发现联合检测一组精心挑选的抗原抗体可以提高肿瘤早期诊断的灵敏度，同时为使抗原抗体联合检测在临床应用中达到一定的真实性，不同类型的肿瘤可能需要不同的抗原抗体组合[3，7]，但至目前，国内没有关于 TAA 抗体在乳癌中应用的相关报道。

该研究结果表明，单独应用一种抗原抗体检测时灵敏度普遍偏低，最高不到33%，在乳癌诊断中没有实际意义;随着TAA组合抗原种类的增加，直到最后8种TAA的联合检测，诊断的灵敏度有明显上升，达到72.2%，而特异度则无明显下降，说明联合检测确实可以提高乳癌的阳性检出率。

该研究中所采用的抗原组合并不包括目前国际肿瘤学研究领域普遍认可的与乳癌相关性较高的CA153和CEA，主要原因是CA153在乳癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期诊断的灵敏度分别只有10% ～15%、20% ～25%和30% ～45%，而且在正常人群、乳腺良性病变、慢性肝炎、免疫球蛋白病和其他腺癌等中也发现有CA153增高[8];CEA虽然是乳癌临床监测常用指标，但它在乳癌复发诊断中的价值更大[9]。

综上所述，在乳癌的早期诊断中联合检测多种TAA抗体具有一定的应用价值，今后的研究重点应该集中在鉴定和设计乳癌特异的TAA组合，从而建立一种新的乳癌早期体外非侵入性诊断技术。

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[5]李留霞，王甜甜，王凯娟，等.六种肿瘤相关抗原自身抗体微阵列诊断卵巢癌的价值[J].郑州大学学报:医学版，2009，44(6):1235

[6]王鹏，刘会娟，闫平平，等.联合检测肿瘤相关抗原抗体在结直肠癌免疫诊断中价值的研究[J].肿瘤，2009，29(8):761

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