戴珍祥 高志伟

1）南京市六合区人民医院神经内科 南京 211500 2）南通大学附属医院神经内科 南通 226000

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1 实验动物与分组：健康雄性SD大鼠由南通大学实验动物中心提供，共36只，6～8周龄，体质量（250±20）g，随机分为生理盐水组、喹啉组、辛醇组，每组12只大鼠。

1.1.2 试剂与仪器：氯化锂、匹罗卡品、喹啉、辛醇（美国Sigma公司）；兔抗大鼠Cx36多克隆抗体、荧光标记Cx36抗体（北京博奥生生物技术公司）；二抗（碧云天生物技术公司）；冰冻切片机，正置显微镜（德国Leica公司）；电泳仪（美国Bio－Rad公司）。

1.2方法

1.2.1 动物模型制备与处理：氯化锂－匹罗卡品诱导的癫大鼠模型是参照Glien［4］提出的方法，稍作改良后建立的。将大鼠适应性饲养3d，观察大鼠饮食活动正常后称重，将大鼠腹腔注射氯化锂125mg／kg预处理，间隔18～24h后给予匹罗卡品60mg／kg腹腔注射，30min后观察大鼠癫发作程度，达到Racine评分4级及以上的大鼠进入癫持续状态（SE）。模型制备成功30min后分别予以各组大鼠腹腔注射喹啉（60mg／kg）、辛醇（60mg／kg）及等量生理盐水。

1.2.2 Racine评分：根据 Racine［5］制定的标准判断是否有癫发作行为：0级（0分），无任何癫发作；1级（1分），嘴及面部阵挛，咀嚼，哈欠；2级（2分），1级基础上出现点头，面部抽搐，颈部肌肉抽动；3级（3分），2级基础上出现前肢或后肢抽搐；4级（4分），3级基础上出现后肢站立，身体突然立起；5级（5分），4级基础上出现四肢节律性抽动，下肢强直伴全身背曲或抽动，跌倒。分别对各组癫持续状态大鼠模型及给药后30min、1h、2h及3h时进行Racine评分。

1.2.3 Cx36表达检测：各组大鼠分别于给药后2h进行海马Cx36表达检测。（1）免疫荧光方法：用3.5%水合氯醛腹腔注射将大鼠麻醉，开胸暴露心脏，左心室插管，剪开右心耳，先快速灌入温生理盐水100mL至血液冲净，随后灌入4%多聚甲醛500mL固定。……