任芳刘建峰张文娟

新生儿溶血病直抗结果探讨

任芳①刘建峰①张文娟②

目的:探讨直抗阴性和阳性结果与新生儿溶血病(HDN)病情的关系。方法:筛选确认HDN患儿40例，根据直抗结果分为直抗阴性组(20例)和直抗阳性组(20例)，比较两组患儿首次TBIL、DBIL、NSE结果。结果:两组患儿TBIL、DBIL、NSE结果差异无统计学意义(P＞0.05)。结论:直抗阴性并不能排除HDN，且直抗结果不能用于区分病情严重程度。

新生儿溶血病； 直抗试验

新生儿溶血病(Hemolytic Disease of the Newborn， HDN)是由于母婴血型不合，妊娠期间母亲血液中有较多的IgG类抗体，IgG抗体通过胎盘进入胎儿体内，发生同种免疫反应导致胎儿或者新生儿的红细胞破坏而引起溶血。HDN确诊主要通过血清学实验，其中确诊HDN的新生儿直抗实验理论上应均为阳性，但是根据临床上的结果统计发现并非如此，特在此探讨一下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取滨州市人民医院就诊患儿，根据《临床诊疗指南-小儿内科分册》确诊HDN[1]。选取母亲为O型而患儿血型为A型或B型者，入院1～2 d内检查血常规(包括血红蛋白、网织红细胞或有核红细胞)、血清总胆红素、直接胆红素，Coombs’试验(抗人球蛋白试验)等。

1.2 直抗游离放散实验 长春博讯ABO标准红细胞；长春博讯抗人球蛋白检测卡(新生儿溶血病)；长春博讯新生儿ABO、RhD血型检测卡(微柱凝胶)；长春博德酸放散试剂。生化检测：Olympus 2700生化分析仪。

1.3 方法 放散实验采用酸放散方法，其余实验严格按照操作说明进行。酸放散方法：(1)用生理盐水洗涤待检红细胞4次，去除未结合的抗体。(2)取4体积的放散液A与1体积的放散液B混合均匀。(3)将1 ml待检红细胞与1 ml酸放散液混合均匀，室温孵育1～2 min。(4)3000 r/min离心1 min。(5)立即将酸放散液转移到另一支干净的试管中，并加入紫红色中和液调颜色至水粉色，使pH值接近中性，离心1 min取上清液。

2 结果

2.1 直抗阴性和直抗阳性两组患儿微柱凝胶法结果(表1)，包括直抗阴性组20例，直抗阳性组20例。

表1 直抗阴性和直抗阳性两组患儿微柱凝胶法结果 例

2.2 住院后1～2 d内检查血常规肝功等项目，对比两组患儿首次胆红素和NSE结果(表2、图1、图2、图3)。通过比较，两组患儿总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)三项检查结果差异均无统计学意义(P＞0.05)，对比两组患儿临床症状和后续治疗后病情变化，发现直抗结果对于确诊为HDN的患儿病情程度并无意义。

表2 两组患儿胆红素和NSE结果比较(s)

表2 两组患儿胆红素和NSE结果比较(s)

组别 TBIL(μmol/L) DBIL(μmol/L) NSE(ng/ml)直抗阴性组 263.5±127.4 10.1±2.6 43.8±18.8直抗阳性组 256.5±115.2 10.6±4.3 44.6±19.9 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

图1 两组患儿TBIL结果

图2 两组患儿DBIL结果

图3 两组患儿NSE结果

3 讨论

ABO血型抗体是“天然抗体”，多为IgM，而“免疫性抗体”常为IgG，IgG抗体，除可由红细胞抗原刺激产生外，还可以由如血清、唾液、胃液、卵巢囊肿液、精液、羊水、汗液、尿液、泪液、胆汁等多种非特异性物质中多种组织细胞及体液中存在的ABO血型物质刺激产生，以及由于肠道寄生虫感染，注射伤寒菌苗、破伤风或白喉类毒素等非特异性刺激而引起免疫性抗体。A型和B型人血型抗体多为IgM，极少有IgG。IgM抗体分子量大不能通过胎盘，而O型母亲体内IgG抗体较多，免疫性抗A或抗B抗体(IgG)可通过胎盘，抗体进入胎儿体内后附着在胎儿红细胞膜与对应抗原发生免疫性溶血反应，所以丈夫血型为A型、B型或AB型者，母亲为O型者，容易引起HDN。而且由于存在上述因素均可使孕妇产生抗体，所以ABO溶血病可以在第一胎发病[2-3]。

直抗、游离、放散试验对于辅助诊断HDN有重要的临床价值。直接抗人球蛋白试验为阴性，理论上应该不需要再进行游离和放散试验。但是在临床中发现并非如此，许多直抗阴性的患儿仍有许多确诊为HDN。ABO新生儿溶血病(ABO HDN)的诊断常以直抗游离放散试验结果而定，但是收到的检验报告中，直接抗人球蛋白试验(DAT)常呈阴性结果，这给确诊带来一些困难。在本研究中，笔者对比直抗阴性和直抗阳性两组患儿总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)结果，发现两组数据差异均无统计学意义(P＞0.05)，说明直抗阴性实验的患儿仍有可能发生HDN，不能被忽视。

HDN患儿黄疸易于生理性黄疸混淆，而且如抢救不及时，进展迅速，严重者可致核黄疸，致后遗症或死亡。而早期发现的HDN患儿根据《母婴ABO血型不合溶血病临床路径》的标准治疗[4]，如光疗和换血疗法等均可取得满意的治疗效果，并且无后遗症。希望直抗检测试验能提高实验阳性率，如通过采用年轻、年老红细胞分离方法提高DAT的敏感性，或者通过新的技术改良提高阳性率为临床提供可信的实验结果。

[1] 中华医学会. 临床诊疗指南：小儿内科分册[M].北京: 人民卫生出版社，2005:1-476.

[2] 李勇，马学严.实用免疫血液学[M].第2版.西安:科学出版社，2006:562-570.

[3]卢磊，刘燕. 微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用[J].中国现代医生，2010，48(13):38-39.

[4]卫办医政.卫生部办公厅关于印发小儿内科19个病种临床路径的通知[EB/OL]. http://www.ch-cp.org.cn/action-viewnews-itemid-149，2012-01-01.

The Discussion of the Direct Antiglobulin Experimental Results in HDN

/REN Fang， LIU Jian-Feng， ZHANG Wen-juan. //Medical Innovation of China，2012，9(22)：070-071

Objective: To investigate the difference of the direct antiglobulin negative results and the positive results for HDN.Method: Screened 40 cases of HDN children， and divided into the negative group (20 cases) and the positive group (20 cases) according to direct antiglobulin experimental results. Compared the first results of TBIL ，DBIL and NSE. Result： TBIL， DBIL and NSE results between the two groups of children were no significant difference(P＞0.05). Conclusion: The negative result of direct antiglobulin test can not use to exclude HDN， and can not be used to distinguish the severity of disease.

Hemolytic Disease of Newborns; Direct Antiglobulin Test

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.22.042

2012-05-18) (本文编辑：车艳)

①山东省滨州市人民医院 山东 滨州 256600

②山东省滨州市妇幼保健院

任芳

First-author’s address：Binzhou City People’s Hospital， Binzhou 256600，China