纪军建， 张小风， 韩秀英， 赵建江， 马志强， 王文桥＊

（1.河北省农林科学院植物保护研究所／河北省有害生物综合治理工程研究中心，保定 071000；2.河北农业大学植物保护学院，保定 071001）

由灰葡萄孢（Botrytis cinerea Pers.ex Fr.）引起的番茄灰霉病是番茄的重要病害之一，在世界范围内均有相关报道［1］。该病菌的寄主多达230余种，除侵染番茄的果实外，还可侵染番茄的茎、叶、花，造成严重减产，甚至绝收［2］。生产上以化学防治为主，王汉荣等［3］报道，50%腐霉利、50%异菌脲、50%乙霉·多菌灵和10%苯醚甲环唑在田间施药3次后，防 治 效 果 分 别 达 到 83.10% ～85.05%、87.99%、88.15%和90.38%。张传清等［4］报道，番茄灰霉病菌对啶酰菌胺的敏感基线为1.07μg／mL。王立君等［5］报道，50%啶酰菌胺、40%嘧霉胺和25%吡唑醚菌酯对番茄灰霉病的田间防效分别为86.36%、82.30% 和 74.14%。李 生 英 等［6］报 道，10%腐霉利烟剂对保护地番茄灰霉病的防效达80.11%～86.73%。祁之秋等［7］报道，室内测定醚菌酯对番茄灰霉病的保护和治疗作用分别达到92.3%和83.3%。葛晨辉等［8］报道，50%乙霉·多菌灵1 000倍液对温室番茄灰霉病的防效可达95.98%。Sobolewski等［9］报道，BSA516、Zato45WG、Uni－kat75WG、Verita71.9WG、Tanos50WG和Biosept33SL对防治番茄灰霉病有明显效果。Tadesse等［10］报道，苯氟磺胺（dichlofluanid）对番茄灰霉病的防效可达92%以上。Nagata等［11］报道，对苯胺基嘧啶类杀菌剂的苯胺环进行替代修饰以后，发现2－苯胺－4－甲基－6－（1－丙炔）嘧啶（KIF－3535）对番茄灰霉病菌有很高的活性。但国内外报道灰霉病菌对常用化学杀菌剂已经产生不同程度的抗药性［12－14］。相关研究报道，苯基吡咯类杀菌剂咯菌腈对灰霉病有良好的防治效果［15］。刘颖超等［16］报道，2.5%咯菌腈种子处理悬浮剂对草莓灰霉病菌菌丝生长的EC50值为0.0472mg／L，田间防效为83.7%。George等［17］2010年在希腊塞萨洛尼基测定了76株灰葡萄孢单孢菌株对咯菌腈的敏感性，未发现对咯菌腈敏感性下降的菌株；Zhao等［18］2010年测定了咯菌腈对采自华盛顿苹果上的83株灰葡萄孢EC50的平均值为0.005mg／L，对从梨上分离到的40株灰葡萄孢的EC50的平均值为0.005mg／L。

本文测定了番茄灰霉病菌对不同类型杀菌剂的敏感性，及分别采集于山东寿光和河北定州、徐水等地的106株番茄灰霉菌株对咯菌腈的敏感性，为更好地防治番茄灰霉病进行药剂选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试培养基

PDA培养基（马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉20g，加去离子水定容至1L）。

1.1.2 供试药剂

95%咯菌腈原药，无锡凯姆麦高化学品有限公司提供；98%氟啶胺原药，山东绿霸化工股份有限公司提供；98%腐霉利原药，连云港优士化学品有限公司提供；98.2%嘧霉胺原药，河南春光农化有限公司提供；99%吡唑醚菌酯原药，河北普田农业科技有限公司提供；99%啶酰菌胺原药，巴斯夫（中国）有限公司提供；98%多菌灵原药，山东华阳化工有限公司提供；95%乙霉威原药，江苏蓝丰生物化工股份有限公司提供。

1.1.3 供试菌种

供试菌株分别于2010、2011年采集于山东寿光稻田镇张家营（以s＋序号命名，共30株）、河北定州杨家庄乡辛兴村（以d＋序号命名，共32株）、河北徐水高林村镇白塔铺村（以x＋序号命名，共44株）温室内番茄病叶病果上，在室内PDA培养基上分离纯化后，4℃保存备用。

1.2 试验方法

1.2.1 番茄灰霉病菌对不同杀菌剂的敏感性测定

菌丝生长速率法［19］。在无菌条件下，用直径为5mm的打孔器在预培养3d的番茄灰霉病菌菌落边缘打菌饼，接种到含系列浓度的试验药剂及无药的PDA平板上，每个处理重复3次，于25℃培养箱中黑暗培养，3d后采用十字交叉法测量各处理菌落直径（mm）。并用DPS求出供试药剂抑制菌丝生长的有效抑制中浓度（EC50值）及相关系数（R）。

1.2.2 番茄灰霉病菌对咯菌腈的敏感性测定

采用菌丝生长速率法（同1.2.1）。打取菌饼后，分别接种到含咯菌腈0.001、0.01、0.1、1、10μg／mL及无药的PDA平板上，25℃恒温黑暗培养，3d后采用十字交叉法测量各处理菌落直径（mm），并用DPS求出各菌株对咯菌腈的EC50值。

2 结果与分析

2.1 番茄灰霉病菌对不同杀菌剂的敏感性

试验结果（如表1）显示，山东寿光、河北徐水等地的番茄灰霉病菌对咯菌腈和氟啶胺均表现为高度敏感，其EC50值分别为0.004 0、0.010 2μg／mL和0.026 8、0.026 9μg／mL。山东寿光的番茄灰霉病菌对其他不同类型杀菌剂的敏感性由高到低依次为：啶酰菌胺、腐霉利、嘧霉胺、吡唑醚菌酯、多菌灵、乙霉威，河北徐水的番茄灰霉病菌对其他不同类型杀菌剂的敏感性由高到低依次为：腐霉利、吡唑醚菌酯、啶酰菌胺、嘧霉胺、多菌灵、乙霉威。

2.2 番茄灰霉病菌对咯菌腈的敏感性

经菌丝生长速率法测得山东寿光和河北定州、徐水等地的106个番茄灰霉病菌菌株对咯菌腈的EC50值分布在0.003 9～0.044 9μg／mL之间（如图1），显示这106个菌株对咯菌腈高度敏感，无抗性菌株。其中66.04%的菌株EC50值分布在0.005～0.015μg／mL之间，31.13%的菌株EC50值分布在0.015～0.040μg／mL之间，只有1株的EC50值为0.044 9μg／mL。图1表明，绝大部分的番茄灰霉病菌对咯菌腈的EC50值分布在0.005～0.015μg／mL之间，106个菌株对咯菌腈的平均EC50值为（0.014 2±0.008 1）μg／mL。

表1 番茄灰霉病菌对不同杀菌剂的敏感性

图1 106个不同番茄灰霉病菌菌株对咯菌腈的敏感性

3 讨论

通过室内菌丝生长速率法检测了山东寿光和河北徐水两地的相对敏感番茄灰霉病菌对8种不同杀菌剂的敏感性，结果显示，对苯基吡咯类杀菌剂咯菌腈表现最为敏感；对吡啶胺类杀菌剂氟啶胺也表现出较高的敏感性，但目前还没有登记用来防治灰霉病，2009年徐生军等报道，马铃薯晚疫病菌对氟啶胺的平均EC50值为（0.478 1±0.016 3）μg／mL［20］；而两地的番茄灰霉病菌菌株对多菌灵表现出很低的敏感性，Bollen和Scholten首次在室内仙客来上发现抗苯菌灵的灰霉病菌［21］。周明国、叶钟音等在草莓上首先检测到抗多菌灵的灰霉病菌［22］。寿光番茄灰霉病菌对腐霉利的EC50值为8.194 1μg／mL大于保定的2.107 5μg／mL，而韩巨才等［23］报道，检测到山西的抗性菌株对腐霉利的平均EC50值为2.792 1μg／mL。两地对嘧霉胺的敏感性相差不大，值得注意的是试验测得对与苯并咪唑类杀菌剂有负交互抗性的N－苯氨基甲酸酯类杀菌剂乙霉威的敏感性也大大降低，其EC50值远大于200μg／mL。张永杰等报道，检测山西对乙霉威的抗性菌株的平均EC50值为1.556 3μg／mL［24］。2010年赵建江等报道，测得河北徐水和山东寿光的番茄灰霉病菌对烟酰胺类杀菌剂啶酰菌胺的EC50值分别为4.278 2μg／mL和1.462 9μg／mL［25］，本试验结果与其报道的基本一致。本试验显示QoI类杀菌剂吡唑醚菌酯对河北保定地区番茄灰霉病菌的菌丝生长有较好的抑制作用，但对山东寿光地区的番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用较差，原因可能与该杀菌剂在山东寿光长期大量或长期单一使用有关。

本试验检测了2010、2011年山东寿光和河北定州、徐水等地的番茄灰霉病菌对咯菌腈的敏感性，结果显示所有的番茄灰霉病菌均对咯菌腈高度敏感，最小 EC50值为0.003 9μg／mL，最大 EC50值为0.044 9μg／mL。Korolev等报道采自8种寄主作物的712株灰霉病菌对咯菌腈和环酰菌胺的抗性菌株频率为0.2%［26］。综上所述，咯菌腈在防治番茄灰霉病时可作为首选药剂，啶酰菌胺可作为候选药剂。但为了避免或延缓抗药性的产生，应将咯菌腈与不同作用机理的药剂交替或混用。

［1］ 陈凤平，韩平，张真真，等.啶菌噁唑对番茄灰霉病菌的抑菌作用研究［J］.农药学学报，2010，12（1）：42－48.

［2］ 康立娟，张小风，王文桥，等.灰霉菌的抗药性与适合度测定［J］.农药学学报，2003，5（2）：39－42.

［3］ 王汉荣，茹水江，王连平，等.不同药剂及施药方法对番茄灰霉病的防治效果［J］.中国农学通报，2003，19（6）：197－200.

［4］ Zhang C Q，Yuan S K，Sun H Y，et al.Sensitivity of Botrytis cinereafrom vegetable greenhouses to boscalid［J］.Plant Pathology，2007，56：646－653.

［5］ 王立君，陈国，杨挺，等.几种杀菌剂防治番茄灰霉病试验［J］.浙江农业科学，2009（1）：162－163.

［6］ 李生英，张应年，徐飞.10%腐霉利烟剂防治番茄灰霉病药效试验［J］.现代农药，2004，3（5）：40－41.

［7］ 祁之秋，王英姿，李兴海，等.醚菌酯对番茄灰霉病菌的生物活性及其防病方式研究［J］.中国植保导刊，2008，28（12）：5－7.

［8］ 葛晨辉，王全华，尹国香，等.多霉清防治温室番茄灰霉病药效试验［J］.农药，2003，42（3）：29.

［9］ Sobolewski J，Robak J.New fungicides used for complex control of diseases on tomato growing in the field and in the greenhouse［J］.Progress in Plant Protection，2002，42（2）：790－792.

［10］ Tadesse M，Steiner U，Hindorf H，et al.Bryophyte extracts with activity against plant pathogenic fungi Ethiopian［J］.Journal of Science，2003，26（1）：55－62.

［11］Nagata T，Masuda K，Maeno S，et al.Synthesis and structure－activity study of fungicidal anilinopyrimidines leading to mepanipyrim （KIF－3535）as an anti－Botrytis agent［J］.Pest Management Science，2004，60（4）：399－407.

［12］ 丁中，刘峰，王会利，等.番茄灰霉菌的多重抗药性研究［J］.山东农业大学学报，2001，32（4）：452－456.

［13］ Latorre B A，Spadaro I，Rioja M E.Occurrence of resistant strains of Botrytis cinereato anilinopyrimidine fungicides in table grapes in Chile［J］.Crop Protection，2002，21（10）：957－961.

［14］ Myresiotis C K，Karaoglanidis G S，Tzavella K K.Resistance of Botrytis cinereaisolates from vegetable crops to anilinopyrimidine，phenylpyrrole，hydroxyanilide，benzimidazole，and dicarboximide fungicides［J］.Plant Disease，2007，91（4）：407－413.

［15］ 杨玉柱，焦必宁.新型杀菌剂咯菌腈研究进展［J］.现代农药，2007，6（5）：35－39.

［16］ 刘颖超，张金林，庞民好，等.咯菌腈对草莓灰霉病Botrytis cinerea的毒力及防效研究初报［J］.农药学学报，2002，4（3）：94－96.

［17］ George A B，Thomas V，Olga K，et al.Multiple resistance of Botrytis cinereafrom kiwifruit to SDHIs，QoIs and fungicides of other chemical groups［J］.Pest Management Science，2010，66（9）：967－973.

［18］ Zhao H，Kim Y K，Huang L，et al.Resistance to thiabendazole and baseline sensitivity to fludioxonil and pyrimethanil in Botrytis cinerea populations from apple and pear in Washington State［J］.Postharvest Biology and Technology，2010，56（1）：12－18.

［19］ 赵卫松，韩秀英，齐永志，等.辣椒疫霉对双炔酰菌胺的敏感性测定及其抗药突变体生物学性状研究［J］.农药学学报，2011，13（1）：21－27.

［20］ 徐生军，姚亮亮，李新新，等.黑龙江省和吉林省马铃薯晚疫病菌对氟啶胺和甲霜灵的敏感性变化［J］.植物保护，2009，35（5）：80－85.

［21］ Bollen G.Acquired resistance to benomyl and some other systemic fungicides in a stain of Botrytis cinerea in cyclamen，Neth.［J］.Journal Plant Pathology，1971，77：83－90.

［22］ 周明国，叶钟音.植物病原菌对苯并咪唑类及相关杀菌剂的抗药性［J］.植物保护，1987，13（2）：22－31.

［23］ 韩巨才，闫秀琴，刘慧平，等.灰霉病原菌对速克灵的抗性监测［J］.山西农业大学学报，2003，23（4）：299－302.

［24］ 张永杰，闫秀琴，韩巨才，等.山西省灰霉病菌对乙霉威的抗性监测［J］.山西农业大学学报，2003（4）：308－327.

［25］ 赵建江，韩秀英，张小风，等.啶酰菌胺和咯菌腈对番茄灰霉病菌不同菌株的毒力（初报）［J］.河北农业科学，2010，14（8）：139－140.

［26］ Korolev N，Mamiev M，Zahavi T，et al.Resistance to fungicides among Botrytis cinerea isolates from tomato and other hosts in Israel［J］.Acta Horticulturae，2009，808：367－375.