盖仁华，平 丽，李广兴

（1.浙江大学药物安全评价研究中心，浙江杭州310058；2.东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030）

白细胞介素2（interleukin 2，IL－2）是一种具有多种生物活性的细胞因子，研究表明［1］，IL－2是 T细胞在体外长期生长所必需的因子，也是TC细胞成熟因子，它可促进已活化的T细胞增殖、分化、成熟成为效应的TD细胞和TC细胞，诱导T细胞表面IL－2R的表达增加；可使B细胞活化、增殖，产生抗体；还可活化单核／巨噬细胞，并能够增强其杀瘤活性。在体内，IL－2是参与免疫应答的重要细胞因子，还可参与抗肿瘤及移植排斥反应［2］。

IL－2具有重要的生物学特性，可用于免疫治疗，协同治疗恶性肿瘤［3］及感染性疾病等［4－5］，目前IL－2在法国已。获准用于艾滋病的辅助性治疗［6］。本研究通过RT－PCR方法克隆了奶牛IL－2基因，并对其序列进行了分析，旨在为大量制备和生产高效价廉的奶牛IL－2，为在体外大量表达奶牛IL－2并获得重组蛋白积累资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 青年黑白花奶牛，来源于成高子奶牛养殖场。

1.1.2 菌种、质粒、工具酶和主要试剂 Trizol抽提试剂盒为Invitrogen公司产品，p MD18－T载体、DH5α、各种工具酶、反转录试剂盒及回收试剂盒为宝生物工程（大连）有限公司产品；淋巴细胞分离液为MP Biomedicals生物医学公司产品。

1.2 方法

1.2.1 引物的设计与合成 根据GenBank上发表的奶牛IL－2基因序列（序列号：NM＿180997）使用Premier 6.0和 Oligo6.0设计一对特异性引物：P1：5′－CCCCGAATTCATGTCAGCAATGTACAAGATAC AACTCTTGTCTTGC－3′ ；P2：5′－GGGGCTCGAGT CAAGTCATTGTTGAGTAGATGC－3′。P1含Eco RⅠ酶切位点及起始密码子，从起始密码子起36个碱基均与GenBank上发表的奶牛IL－2基因序列同源。P2含XhoⅠ酶切点及终止密码子，引物序列与Gen－Bank上发表的奶牛IL－2基因序列的475位～498位互补，预期扩增目的片段大小为477 bp。……