苗立中，沈志强，韩文瑜

（1.吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062；2.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600）

副猪嗜血杆菌病被称为猪革拉泽氏病，是由副猪嗜血杆菌（Haemophlius parasuis，HPS）感染引起的猪的一种传染病［1］。近年来，随着规模化养猪业的发展，该病已成为影响养猪业的新发典型细菌性疾病［2］，给我国养猪业带来了巨大的经济损失。目前，我国对副猪嗜血杆菌病的诊断主要通过传统的病原分离与培养、血清学方法以及常规分子生物学方法。但由于HPS对营养要求苛刻，直接从病料中很难分离到HPS，且该菌培养期间易发生杂菌污染，不易纯化［3］。已有多位学者建立了检测HPS的PCR方法，但是这些常规PCR方法无法对病料中的HPS进行准确定量检测，而且都较繁琐，容易出现假阳性，检测结果具有波动性［4－5］。因此，有必要建立一种新的定量检测技术。

Real－time PCR是在PCR定性技术的基础上发展起来的核酸定量技术，为实时监测PCR扩增并进行定量解析的方法。Real－time PCR具有操作简单、快速、灵敏度高、特异性好及可靠性强的优点，同时又实现了对模板的准确定量，其检测线性范围较宽，不易出现假阳性，在整个反应过程中可自动通过分析荧光信号记录数据，对扩增产物进行精确定量分析，解决了PCR假阳性和溴化乙锭（EB）对环境的污染问题［6］，已成为病原学检测的重要手段［7］。

本方法选取HPS的inf B基因中一段高度保守的基因序列作为目的片段，由此设计一对特异性引物，建立HPS基于SYBR Green I荧光染料的荧光定量PCR快速诊断和定量分析检测方法。……