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抗大肠杆菌荧光抗体的制备及其特性

2012-09-25孙庆元,王建军,刘建文,郇晓娜,朱友双

大连工业大学学报 2012年5期
关键词:检测

孙 庆 元, 王 建 军, 刘 建 文, 郇 晓 娜, 朱 友 双

( 大连工业大学 生物工程学院, 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

大肠杆菌在自然界广泛分布,主要寄居于人和动物肠道中。近年来,家禽大肠杆菌病在国内大多数养殖场中广泛流行,发病率和死亡率居高不下,很多地方已呈爆发性流行的趋势,严重威胁着养禽业,造成了巨大的经济损失。

目前,致病菌的检测方法主要是实时荧光定量PCR技术[1-3]、流式液相芯片检测方法[4]和酶联免疫法[5]等。到目前为止,国内有关荧光标记抗体检测大肠杆菌方法的报道还很少。由于传统的细菌鉴定工作量大、费时长并只能用于粗略检测, 因而人们都在寻求对重要病原菌快速、简单、准确的检测方法。本研究以大肠杆菌为案例,采用荧光抗体技术来检测大肠杆菌的存在, 以期达到快速、准确诊断疾病的目的。异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate, FITC) 能与抗体交联,抗体仍能保持与相应抗原结合的能力。荧光抗体在荧光灯源紫外线或蓝紫光激发下产生黄绿色荧光,通过荧光显微镜可对相应抗原进行定性、定位和定量的检测[6-8]。

1 材料和方法

1.1 试剂与仪器

新西兰大白兔,小白鼠,大肠杆菌;异硫氰酸荧光素(FITC);弗氏不完全佐剂 (incomplete Freund′s adjuvant, IFA);双缩脲试剂。

UV755B紫外/可见光分光光度计,轮转式切片机,倒置荧光显微镜。

1.2 方 法

1.2.1 抗大肠杆菌免疫血清的制备

免疫源的制备:实验前一天,在37 ℃、200 r/min 条件下,于20 mL营养肉汤中过夜培养大肠杆菌。10 000g、20 min、4 ℃离心,将上清液与沉淀分离,所得沉淀即是大肠杆菌菌体。用1 mL生理盐水溶解沉淀,制备得到大肠杆菌菌悬液备用。……

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