赵 洪 娥, 崔 励

( 大连工业大学 轻工与化学工程学院, 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

2′-脱氧腺苷是一种天然的脱氧核苷,是脱氧核糖核酸DNA的结构片段,是基因药物和基因工程研究的重要原材料,具有很好的生理活性,经过化学结构修饰得到的2′-脱氧腺苷类似物具有良好的抗肿瘤活性,因此在市场上有广泛需求[1-2]。2′-脱氧腺苷可通过脱氧核糖核酸的降解而得到,但是由于DNA供应的不稳定,以及降解后产物分离困难等原因,使得该方法并不实用。2′-脱氧腺苷也可通过化学合成法合成,但其步骤过于复杂[3],比如一些基团的保护与去保护以及糖基的活化等[4]。通过生物转化法合成2′-脱氧腺苷,具有步骤简单等优点,避免了以上不足。本实验的原料为2′-脱氧腺苷的生物转化液,其主要成分有核糖基供体2′-脱氧胸苷、碱基供体腺嘌呤、副产物胸腺嘧啶和主产物2′-脱氧腺苷[5-6]。

目前国内外学者对提高2′-脱氧腺苷转化率的研究较多[6-7],有关提取纯化工艺的文献报道却很少。本实验采用结晶法对生物转化液中的2′-脱氧腺苷进行分离纯化、富集,为其工业化生产提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

乙醇、碳酸钠、盐酸、氢氧化钠、标准品2′-脱氧腺苷,均为分析纯；甲醇,色谱纯；2′-脱氧腺苷生物转化液,实验室自制。

岛津高效液相色谱仪,UV检测器(SPD-10A),C18反相柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)。

1.2 实验方法

1.2.1 2′-脱氧腺苷的分离、纯化

预处理:将实验室制得的生物转化液离心(室温,4 200 r/min,10 min)除去菌体,得到上清液,其中2′-脱氧腺苷的质量浓度为10.5 g/L,腺嘌呤质量浓度2.3 g/L,胸腺嘧啶质量浓度3.1 g/L,于4 ℃保存备用。……