张 曦, 寇 自 农, 石 羽 佳, 朱 靖 博,3

( 1.大连工业大学 食品学院, 辽宁 大连 116034; 2.大连工业大学 分析测试中心, 辽宁 大连 116034; 3.大连工业大学 植物资源化学与应用研究所, 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

蛋白质与其他物质发生相互作用时,蛋白质的荧光强度也会发生改变,这一变化是表征二者相互作用非常有效的方法。现有利用荧光光谱法研究小分子药物如秋水仙碱、Indo-1、芦丁等[1-3]与血清白蛋白相互作用的报道,然而未见文献报道研究丹酚酸A与血清白蛋白之间的相互作用。作为载体蛋白,其在血浆中含量丰富,能和许多内源小分子以及外源性物质广泛结合,在配体的传输和存储过程中起着十分重要的作用。因此研究丹酚酸A与血清白蛋白相互作用的信息对深入研究丹酚酸A的作用机制奠定了理论基础。

本实验在生理pH条件下研究丹酚酸A与牛血清白蛋白之间的相互作用,根据荧光猝灭光谱计算两者的结合常数和结合位点数,并判断它们之间的主要作用力类型。

1 材料与方法

1.1 试 剂

BSA用pH=7.4的Tris-HC1缓冲溶液配制成5×10-5mol/L的母液,4 ℃低温保存备用；丹酚酸A标准品,现用现配,工作液配制为梯度浓度；实验用水为超纯水,其他试剂均为分析纯。

1.2 方 法

10 mL比色管中,依次加入0.5 mL 5×10-5mol/L 的BSA溶液和1.0 mL一定浓度的丹酚酸A溶液,超纯水定容至4 mL,混合均匀。在荧光光谱实验中,移取一定量该混合溶液于石英荧光池中。以280 nm为激发波长,设置激发狭缝宽度为7.0 nm,发射狭缝宽度为7.0 nm,扫描速率为600 nm/min,分别在25、30、35 ℃下测定288～488 nm的荧光发射光谱。……