毛 泽 仁, 张 景, 金 凤 燮, 鱼 红 闪

( 1.大连工业大学 生物工程学院, 辽宁 大连 116034; 2.大连市产品质量监督检验所, 辽宁 大连 116021 )

0 引 言

绞股蓝中含有多种化学成分[1-2],其中以绞股蓝皂苷为主要的药理活性成分。绞股蓝皂苷(Gypenosides)是绞股蓝全草的有效成分,具有多种医疗保健功能[3]。自然界中绞股蓝皂苷多是由绞股蓝皂苷元与葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、木糖及阿拉伯糖等糖基连接而成,这种结构不是其生物活性的最佳状态,若将其转化为低糖基皂苷或皂苷元,它的生物活性有可能会得到提高。

本实验室前期筛选出的Absidiasp. GYP4r菌,能够产生一种可将绞股蓝皂苷水解为低糖基绞股蓝皂苷的酶[4],该酶有可能提高绞股蓝皂苷的生物活性。本实验对绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及性质进行了研究,为今后绞股蓝皂苷糖苷酶的分子生物学性质进一步研究提供了一定的理论基础。

1 材料与方法

1.1 材 料

实验菌种Absidiasp.GYP4r,由大连工业大学菌种保藏所提供；绞股蓝皂苷；人参皂苷标准品，实验室自制；薄层层析板,德国Merk公司提供。

1.2 方 法

1.2.1 培养基的制备

斜面培养基的制备:准确称取硝酸钠3.0 g,磷酸二氢钠1.0 g,七水合硫酸镁0.5 g,氯化钾0.5 g,硫酸钾0.5 g,硫酸亚铁0.01 g,蔗糖30.0 g,琼脂15 g,用去离子水定容至1 000 mL,121 ℃湿热灭菌后备用。

扩大培养基的制备:称取麦麸16.0 g,槐花4.0 g(作为诱导物),溶于20 mL去离子水中,121 ℃ 湿热灭菌后待用。

1.2.2 菌种的培养及粗酶液的提取

将菌种接种于已灭菌的斜面培养基中,在30 ℃的恒温箱中培养6～7 d,活化后的菌放于冰箱内保存。将斜面菌种接种于已灭菌的扩大培养基中,仍在30 ℃的恒温箱中培养6～7 d。……