杨荣 许翠萍 李晓艳 刘娟 高海晋

随着肝硬化和肝癌的发病率的增高，肝脏再生机制的研究也越来越受到人们的关注。肝脏再生过程需要多种信号转导通路的参与，其中骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins，BMPs)信号转导通路是肝再生过程中一条重要的信号转导通路[1]。我们前期的研究发现BMP-4在正常肝组织中于中央静脉、汇管区周围的肝细胞胞浆内中度表达[2]。本实验选用BMP-4的直接拮抗剂Noggin进行干预，进一步研究BMP-4在肝再生过程中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料 重组鼠Noggin试剂盒购自于美国R&D Systems,Inc.试剂公司，兔抗鼠BMP-4多克隆抗体、即用型SP试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司，DAB显色剂购自武汉博士德生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 肝再生模型建立：取成年健康、雄性Wistar大鼠80只，体重180～220g，适应性喂养1周，随机分为四组，8只作为正常对照组(NC),余72只制作PH模型，将模型鼠随机分为生理盐水组(NS,n=24)、Noggin低剂量组(NL,n=24)和Noggin高剂量组(NH,n=24)。模型鼠各组采用Higgins[3]经典方法行PH术, 即腹部正中切口进入腹腔，挤出肝脏的左叶和中叶并于肝蒂部结扎后切除（切除量约占全肝的68%～70%），术后关闭腹腔前分别给予NS、NL、NH组等渗盐水（1ml/kg）、Noggin（500ng/kg）、Noggin(2500ng/kg)注射，术后24h、48h腹腔各注射一次直至处死。

1.2.2 标本准备 各组大鼠均于PH前及处死前称体重，PH术中被切除的肝叶予以称湿重，术后在各观察时间点采用1%戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔注射麻醉，切除再生肝称湿重，NC组直接麻醉取肝组织称湿重。取部分再生肝组织以10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4μm切片，以供免疫组织化学检测。

1.2.3 检测方法

1.2.3.1 肝再生率的测定：肝再生率（%）=再生肝重与术后体重之比/术前肝重与术前体重之比×100%[4]。……