BALB/C小鼠不同组织RNA提取方法的比较
2012-09-20曲娟娟
东北农业大学学报 2012年12期
于 敏,曲娟娟,王 征,朱 超
(1.东北农业大学资源与环境学院,哈尔滨 150030;2.黑龙江中医药大学药物安全性评价中心,哈尔滨 150040)
BALB/C小鼠特别是在单克隆抗体制备及免疫学试验中应用广泛,高纯度及完整的总RNA提取及纯化对后续的分子生物学试验重要。小鼠组织总RNA提取的方法一般采用传统的高浓度强变性剂异硫氰酸胍或蛋白质变性剂十二烷基硫酸钠以及Invitrogen公司TRIpure商品化试剂盒[1]。传统提取方法将裂解细胞的核蛋白体解离,并通过酸性苯酚使RNA进入水相,在离心后使RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离,此类方法成本较低但步骤繁琐[2]。商品化总RNA提取试剂盒具有方法简单、RNA质量可靠的优点,但RNA产品中常伴有大分子质量染色体DNA污染,特别是以复杂的动物组织为原材料时,这一问题显得特别突出[3]。商品化的核酸提取试剂盒在该实验领域中有广泛应用,一些比较知名的国外公司,其生产的试剂盒有较高的回收效率,与传统的核酸提取方法相比,操作更简单,更快速,并且大大降低样品污染的可能性。本试验主要以某公司的TRIzol试剂、氯化锂和某公司商品化的试剂盒分别提取了BALB/C小鼠心脏、肝脏和肾脏组织的基因组RNA,通过紫外分光光度计测定光吸收值、琼脂糖凝胶电泳及RT-PCR方法,比较不同方法和组织中提取的RNA质量,为后续的试验工作奠定基础。
1 材料与方法
1.1 动物
清洁级,体重20~25 g的雄性健康BALB/C小鼠(购自黑龙江中医药大学药物安全性评价中心)。
1.2 主要试剂及仪器
RNA提取试剂盒、TRIzol试剂、氯化锂、氯仿(分析纯)乙醇等;……
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