王志平

(1渭南师范学院化学与生命科学学院，陕西渭南714000;2陕西省多河流湿地生态环境重点实验室，陕西渭南714000)

聚合酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)技术是一项DNA体外扩增技术，主要应用于特异性基因的检测以及生物鉴定等方面.1983年PCR技术发明以来，生物技术迅猛发展.早期的PCR定量方法都是基于产物的终点浓度测定，20世纪90年代实时(real-time)PCR的发明推动了PCR定量技术的发展与应用［1－2］.荧光定量PCR是在普通PCR技术基础上建立的一种核酸定量技术，即在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累对整个PCR进程进行实时监测，并根据标准曲线对未知模板进行定量.目前，该技术已广泛应用于疾病诊断、食品检测、环境监测以及分子生物学研究等领域，而且其应用范围仍在不断拓展.

1 荧光定量PCR技术原理

在荧光定量PCR反应体系中加入一种荧光化学物质，目前，最常用的是SYBR GreenⅠ染料，它能与双链DNA小沟部位结合，而且具有绿色激发波长.在PCR进程的复制和延伸阶段，该染料插入DNA双链中发出荧光，在变性阶段，由于DNA双链解开，染料从DNA分子上游离下来而不产生荧光，因此荧光信号的强弱与双链DNA的量成正比.PCR进程中，随着产物的积累，荧光信号的强度等比加强.每经过一次循环，收集一次荧光信号，即可得到一个荧光扩增曲线(图1)，根据荧光强度的变化即可监测产物量的变化.

通常，荧光扩增曲线可分为三个阶段，即荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段和平台期.在荧光信号指数扩增……