鲤KCTD15基因的克隆和表达
2012-09-19刘伟孙婷张研孙效文
刘伟,孙婷,张研,孙效文
(1.中国水产科学研究院生物技术研究中心,北京100141;2.大连海洋大学水产与生命学院,辽宁大连116023;3.上海海洋大学水产与生命学院,上海201306)
水产品具有低脂肪、高蛋白的特点,是合理膳食结构中不可缺少的重要部分,是人们摄取动物蛋白的主要方式之一[1]。鱼类的肉质主要取决于肌肉中水分、脂肪、氨基酸含量特别是鲜味氨基酸的含量等因素[2]。脂肪对鱼类本身的营养以及鱼类脂肪酸对人类的健康都具有重要作用[3-4]。通过基因组关联研究 (GWAS)发现,KCTD15(Potassium channel tetramerization domain containing 15)在多个人群中被确定为与脂肪过多相关联的基因之一[5-7]。Dutta 等[8]研究表明,KCTD15 基因异常表达抑制神经嵴的分化,而敲除KCTD15基因则导致神经嵴的扩张,即KCTD15基因可抑制神经嵴的扩张使其保持正常范围,而神经系统的发育与生长发育密切相关。目前,关于KCTD15基因的研究报道较少,其功能也尚未确定[7]。鲤Cyprinus carpio是中国最重要的淡水养殖品种之一,KCTD15基因在鲤中的表达规律和功能目前尚未见报道。本研究中,作者克隆了鲤KCTD15基因,并利用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR方法检测其在鲤不同组织和胚胎发育时期的表达差异,为进一步研究KCTD15基因的功能,从而改善鲤的脂肪含量和促进其生长 (胚胎)发育提供基础资料。
1 材料与方法
1.1 材料
试验用鲤采自中国水产科学研究院黑龙江水产研究所,暂养于中国水产科学研究院生物技术研究中心。取新鲜鲤组织(血液、脑、肝胰脏、脾、头肾、体肾、肠、鳃、心脏、皮肤、肌肉、卵巢和精巢)分别保存在RNAsafeguard里;取受精后0、6、12、24、36、48、72 h的受精卵及破膜后3 d和10 d的全鱼,均保存在冰箱(-80℃)中备用。……
