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鲤45S rDNA的染色体荧光原位杂交定位

2012-09-19赵紫霞邓海霞徐鹏张研李炯棠孙效文

大连海洋大学学报 2012年5期

赵紫霞,邓海霞,徐鹏,张研,李炯棠,孙效文

(1.中国水产科学研究院生物技术研究中心,北京100141;2.大连海洋大学水产与生命学院,辽宁大连116023)

鲤Cyprinus carpio是世界上养殖范围较广的经济鱼类,在水产养殖业中占据着非常重要的地位。近年来,随着鲤基因组学和功能基因组学研究的逐步深入[1],已测定了大量的功能基因序列、分子标记序列、表达序列标签等数据,并构建了遗传连锁图谱[2]、细菌人工染色体物理图谱[3]等,然而这些基因组序列在鲤染色体上的定位信息却少见报道。目前,仅有5S核糖体DNA(ribosomal DNA,rDNA)[4]、重复序列 CR1[5]和生长激素转基因片段[6]等得到定位。

45S rDNA编码的3种核糖体RNA参与蛋白质的合成,是细胞内表达量最为丰富的基因[7],也是基因组内典型的中度串联重复序列,每个重复单元由18S rDNA、内转录间隔区1(internal transcribed spacer-1,ITS-1)、5.8S rDNA、内转录间隔区2(internal transcribed spacer-2,ITS-2)和28S rDNA组成,重复单元之间被非转录基因间隔区 (Intergenicspacer, IGS) 所 分 隔[8-9]。45S rDNA存在于所有真核生物中,拷贝数通常为数百个,不同物种间45S rDNA的染色体分布具有较大差异,因而其常被作为物种 (或品种)重要的遗传学特征进行研究。目前,有多个水产物种的45S rDNA定位信息已有报道,如栉孔扇贝Chlamys farreri[10]、泥鳅 Misgurnus anguillicaudatus[11]、多瑙哲罗鲑Hucho hucho[12]等。本研究中,作者通过荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,对鲤45S rDNA序列进行染色体定位。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用鱼采自中国水产科学研究院黑龙江水产研究所松浦实验基地,包括1龄散鳞镜鲤Cyprinus carpio var.scattered mirror 5尾,1龄松浦鲤Cyprinus carpio Songpu 5尾,体长为14.7~19.2 cm,体质量为42~106 g。

1.2 方法

1.2.1 有丝分裂中期染色体的制备 试验鱼在25℃恒温水族箱内暂养48 h后,腹腔注射植物血凝素(上海世泽生物科技有限公司),剂量为60 μg/g(鱼体质量)。……

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