郭莹，李霞，秦艳杰

(1.大连海洋大学农业部北方海水增养殖重点实验室，辽宁大连116023;2.大连海洋大学辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室，辽宁大连116023)

大泷六线鱼Hexagrammos otakii又名欧式六线鱼，隶属于鉳形目 Scorpaeniforms、六线鱼科Hexagrammidae［1］，属于冷温性底层鱼类，主要分布于中国山东和辽宁等地的近海多岩礁海区，日本、朝鲜等国的近海也有分布。该鱼肉味鲜美，营养丰富，有“北方石斑”之称［2］，是中国北方重要的经济鱼类。对大泷六线鱼的生物学研究目前主要集中在形态、生态、遗传育种等领域［3-6］，但关于其细胞体外培养的研究尚未见报道。本研究中，作者主要研究了培养基和生长因子对大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏组织原代培养的影响，建立了3种组织的原代培养体系，旨在为细胞系的构建以及应用提供基础资料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验鱼 大泷六线鱼购自大连黑石礁海边鱼市，全长为160～220 cm，体质量为150～200 g。

1.1.2 培养基和生长因子 L-15培养基、DMEM培养基、DMEM/F12培养基、胎牛血清 (FBS)、胰蛋白酶均为Hyclone公司产品;人碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、Ⅰ型胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、透明质酸酶、Ⅱ型胶原酶均为Peprotech公司产品;硫酸软骨素为Wolsen公司产品。

1.2 方法

1.2.1 细胞原代培养的启动

1)鳍、吻端细胞的培养 将鲜活大泷六线鱼于高双抗消毒海水 (包含1 000 IU/mL青霉素、1 000 μg/mL链霉素)中暂养16～24 h后，在超净工作台上取其鳍和吻端组织，分别放入青霉素小瓶中并加入新配置的双抗消毒液 (包含100 IU/mL青霉素、100 μg/mL链霉素)处理30 min。将双抗吸出，分别用PBS和含有5%(体积分数，下同)FBS的DMEM/F12培养基漂洗组织块一次。……