荣高翔，傅 娟

（湖南工业大学 绿色包装与生物纳米技术应用重点实验室，湖南 株洲 412007）

0 引言

金属硫蛋白（metallothionein，MT）是重金属代谢应答反应中一类重要的小分子蛋白。根据等电点和氨基酸组成的不同，发现MT基因在哺乳动物中至少有MT-1，MT-2，MT-3和MT-4等4种主要形式[1]。其中MT-1和MT-2基因表达范围最广，几乎存在于哺乳动物的所有器官或组织中，尤以肝、肾细胞为主，而且主要被镉特异性诱导[2-3]。在正常水平下，MT-2A基因型的表达量多于MT-1基因，约占所有金属硫蛋白异构体表达量的50%[4]。有报道表明，造成MT-1与MT-2A基因表达量的差异，可能与MT-2A基因启动子区域的增强子活性较强有关[5]。针对美国国家生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）数据库中人类MT-2A基因已发现的27个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNPs）位点中，核心启动子区域TATA盒附近-5A/G（rs 28366003）SNP位点备受关注。本文拟对湖南省株洲市某冶炼工作业人群外周血中MT-2基因核心启动子区域TATA盒附近-5A/G的SNP位点进行检测，分析该人群中基因型分布特点，以期为深入探讨我国汉族人群MT-2A基因多态性特点提供一定参考，也可为进一步探讨MT-2A基因在重金属毒性易感中的作用奠定一定基础。

1 材料与方法

1.1 研究对象

以湖南株洲某冶炼厂作业工人共288例为研究对象（均为汉族）；其中，男性176例，平均年龄为（42.52±14.20） ；女性112例，平均年龄为（38.81±12.48），在研究对象知情并同意下，各抽取外周静脉血5 mL，经EDTA抗凝处理后，于-80℃保存，以备基因组DNA提取。

1.2 主要材料与仪器

MT-2A基因扩增上游引物( FP) 5’-GGG CCG CCT TCA GGG AAC TG-3’，生物素修饰的下游引物( bio-RP) 5’bio-GGA CTT GGA GGA GGC GTG GT-3’；检测等位基因特异性的野生型荧光探针(W-probe) Cy3-CGCTGCACTCCAC和突变型荧光探针(T-probe) Cy5-CGCTGCGCTCCAC ；……