李海霞 韩琛 李一光

杠柳是主产于中国辽宁、吉林、河北、山东、山西等省区的一种萝藦科植物［1］，其干燥的根皮即称为“香加皮”，含有甾醇、酯类等多种化合物［2］，具有祛风湿、强筋骨、利尿、驱虫、升压等多种药理功效［3］。

近年来，随着中药有效成分研究的进展，对于传统中药香加皮研究发现了多种不同于传统应用的药理学作用，例如抗炎作用［4］、强心作用［5］、抗癌作用［6］等，而其中杠柳苷元是香加皮产生抗炎作用的物质基础［4］，并在香加皮抗肿瘤的过程中发挥了重要作用。为观察杠柳苷元的体外抗乳腺癌细胞的作用，对其机制做较为深入的探讨，特开展本实验，为客观评价和进一步开发研究其临床应用价值提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 杠柳苷元由中药香加皮提取纯化而得到，纯度大于98%;MCF7由沈阳药科大学中日医药研究所惠赠;DMEM培养液购自Hyclone公司(UT，USA);胎牛血清购自TBD 公司(天津，中国)，proCaspase-9、Caspase-9、Caspase-3 抗体及辣根过氧化酶标记的二抗购自Santa Cruz公司(CA，USA)，MTT购自Sigma公司(MO，USA)。其他试剂均为分析纯。使用的仪器为二氧化碳培养箱(NuAir，USA)，DYYIII28A型蛋白电泳仪(北京，中国)，酶联免疫分析仪(Tecan，Austria)。

1.2 实验方法 ①MTT法:取处于对数生长期的MCF7细胞，以1×105cell/ml的密度接种于96孔板中，每孔100 μl，培养18 h后，加入含有杠柳苷元(0-160 μm)的培养液，于37℃，5%CO2条件下继续培养18 h，在显微镜下观察细胞形态学的变化后，每孔加入 MTT 15 μl(5 g/L)，DMSO150 μl溶解后，于酶标仪492 nm处检测，测定吸光值，并计算抑制率，绘制各点的抑制率反应曲线。

抑制率(%)=［A492(control)-A492(periplogenin)］/［A492(control)-A492(blank)］×100%。②蛋白免疫印迹法:将MCF7细胞以5×105cell/ml的密度接种于培养瓶中，每瓶8 ml，培养18 h后，加入浓度为0和75 μm的杠柳苷元，作用6、12、18 h后，用0.05%的胰酶将MCF7细胞消化下来，终止消化并将细胞混悬液离心。……