陈鹏，吴限，陈曦

(黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040)

细胞粘附分子是一类介导细胞间或细胞与细胞外基质相互作用的糖蛋白。粘附分子使白细胞、血小板等易于粘附于血管内皮，促进炎症的发生发展。而与脑缺血炎症损伤密切相关的细胞粘附分子主要为选择素家族中的E－选择素(E－selectin)。我们观察了心脑通络液对局灶性脑缺血大鼠脑组织Es－mRNA表达的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及实验药物 参考课题组前期研究成果［1］。

1.2 试剂及仪器 PT－PCR试剂盒(美国Promega);引物设计合成(大连宝生物公司);琼脂糖(北京原平皓生物技术有限公司);DNA Marker DL2000(大连宝生物公司);水平电泳仪(北京六一仪器厂);DYY－8B;PCR扩增仪(德国艾本德);DL2000。

1.3 方法

1.3.1 分组及给药 大鼠随机分为5组，即模型组、假手术组、步长脑心通对照组(简称对照组)、心脑通络液高剂量组(简称高剂量组)、心脑通络液低剂量组(简称低剂量组)，在造模成功48h后各取8只。高、低剂量组和对照组分别于术前5天至处死前，每天给予灌胃给药，高、低剂量组均给予心脑通络液10.71ml/kg/d(低剂量组给药前将心脑通络液用蒸馏水按1∶1稀释);脑心通组给予脑心通0.33g/kg/d;假手术组、模型组则予等体积的的0.9%蒸馏水灌胃，1日1次。

1.3.2 模型建立 参照文献［2］，建立脑梗死大鼠模型，于造模成功后48h检测Es－mRNA表达的变化。

1.3.3 检测指标及方法

在造模成功48h后，检测Es－mRNA表达的变化，按照试剂盒步骤进行。

PCR扩增引物:引物由大连宝生物公司设计和合成，引物序列以及引物特异性介导扩增的PCR产物大小见表1。

表1 PCR扩增引物

1.4 统计学处理

2 结果

对局灶性脑缺血大鼠脑组织E－选择素mRNA表达的影响，见表2及图1。

表2 药物对局灶性脑缺血大鼠脑组织E选择素mRNA表达的影响(±s)

表2 药物对局灶性脑缺血大鼠脑组织E选择素mRNA表达的影响(±s)

注:与模型组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;治疗组与假手术组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01;高低剂量组与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01;高剂量组与低剂量组比较，●P＜0.05，●●P＜0.01。

组别 n E－选择素mRNA假手术组 8 0.43 ±0.07＊＊模型组 8 1.61 ±0.14对照组 8 1.28±0.10＊＊△△低剂量组 8 1.42±0.12＊＊△△#高剂量组 8 1.24 ±0.10＊＊△△●●

结果表明，与模型组比较，局灶性脑缺血48h时，假手术组E－选择素mRNA的表达最低，差异具有统计学意义(P＜0.01);给予心脑通络液和步长脑心通后，各治疗组脑组织E－选择素mRNA的表达均有不同程度降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，以高剂量组降低最为显著，低剂量组与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);高剂量组与对照组比较差异具无统计学意义(P＞0.05)，与低剂量组比较差异具有统计学意义(P＜0.01);各治疗组与假手术组比较，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。

图1 E选择素目的基因和内参照β－actin电泳图

3 讨论

通过多年大量的临床观察，认为气虚血瘀、脑络闭阻为本病发病的主要病机，其机理为虚在肝肾，损在精气血，因虚致瘀，瘀阻脑络，中风乃作，中风乃本虚标实之证。且气虚证候与瘀血证候贯穿病变之始终［3－4］。针对气虚血瘀，脑络闭阻的这一病机特点，我们采用补益气血，活血化瘀为主要治法，选用心脑通络液治疗本病。方中君药为黄芪，黄芪性甘，微温，补气升阳。《本草逢原》:“能通调血脉，流行经络，可无碍于雍滞也”。太子参、菟丝子、当归、水蛭四药为臣药，当归甘辛，微温，补血活血。《本草正》:“当归，其味甘而重，故能补血，其气轻而辛，故能行血，补中有动，行中有补，诚血中之气药，亦血中之圣药……。”太子参性甘、微苦，补脾益气。《饮片新参》:“补脾肺元气，止汗，生津，定虚惊。”水蛭性咸，味苦平，破血逐瘀消癥。菟丝子性甘，味温，补肝肾。川芎、赤芍、桃仁、红花、地龙为佐药。赤芍性苦，味微寒，归肝经，凉血，散瘀。《本草纲目》:“赤芍散邪，能行血中之滞。”地龙性咸，味寒，通经活络。川芎性辛，味温，活血祛瘀。红花性辛，味温，活血通经。桃仁性苦甘，味平，活血化瘀。《本经逢原》:“桃仁入手、足厥阴血分，为血瘀血闭之专药。苦以泄滞血，甘以生新血，毕竟破血之功居多。”

E－选择素是诱导性粘附分子，TNF－α、IL－1或LPS均可刺激内皮细胞合成E－选择素［5］，E－选择素有介导活化的内皮细胞与中性粒细胞粘附的作用。E－选择素介导的粘附作用既不依赖于白细胞的活化，也不需要白细胞整合素的参与。内皮细胞上E－选择素可识别白细胞，介导活化，使白细胞稳定地粘附于内皮细胞，继而迁移至血管外组织。Wang等［6］研究证实，E－选择素mRNA在缺血侧脑组织微血管的表达6h才开始出现，12h达高峰，可持续3～5天。E－选择素主要在直径为7.5～30μm的毛细血管前动脉和毛细血管后静脉的内皮细胞表达。在缺血性脑损伤中发挥着重要作用。

本实验结果显示，与模型组相比，给予心脑通络液和步长脑心通后，各治疗组脑组织E－选择素mRNA的表达均有不同程度降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)，以高剂量组降低最为显著，低剂量组与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);高剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。表明心脑通络液可降低脑组织E－选择素mRNA的表达，从转录水平降低脑组织E－选择素mRNA的表达，减轻炎性细胞的聚集、浸润，减轻炎症和免疫反应，有效减轻局灶性脑梗死引起的缺血性损伤。

［1］ 吴限，陈鹏.心脑通络液对脑梗塞大鼠脑组织凋亡基因Bcl－2、p53 的影响［J］.中医药信息，2011，28(4):64－65.

［2］ Zea － Longa E，Weinstein PR，Carlson，et al.Reversible middle artery occlusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20(1):84 －91.

［3］ 朱慧渊.运用“治未病”理论防治脑中风探析［J］.中医药学报，2010，38(6):6 －8.

［4］ 钞建峰，贾慧，孙风平.试述以“虚”为核心的中风病机观［J］.中医药学报，2011，39(2):67 －68.

［5］ WillamG.Leukocyte responses to injury［J］.Arch Surg，2003，128(11):1260－1267.

［6］ Wang X，Feuerstein GZ.Induced expression of adhesion molecules following focal brain ischemia［J］.J Neurotrauma，1995，12:825 －829.