付晓秀，周国威，齐永秀

(1.山东省聊城市第二人民医院，山东 聊城 252600;2.泰山医学院，山东 泰安 271000)

1 仪器与试药

Waters 600型高效液相色谱仪(美国Waters公司);Empower色谱工作站(美国Waters公司);KQ－500E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。绿原酸对照品(批号为110753－200413，中国药品生物制品检定所);消癌平注射液(通化神源药业有限公司);甲醇为色谱纯(TEDIA);磷酸(H3PO4)、磷酸二氢钾为分析纯;蒸馏水(试验室自制双蒸水)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Diamonsil® C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:A(甲醇)∶B(磷酸－磷酸二氢钾)，梯度洗脱(表 1);流速:1.0 mL/min;检测波长:327 nm，柱温:室温;进样量:20 μL。在上述色谱条件下，消癌平注射液的9个色谱峰均得到良好分离。高效液相色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇溶解并定容，得绿原酸对照品溶液(200 μg/mL);精密移取消癌平注射液1 mL于10 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

精密度试验:精密吸取同一批供试品溶液20 μL，按拟订色谱条件连续进样6次，记录色谱图。以绿原酸色谱峰(3号峰)为参照，计算10批供试溶液各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果的 RSD均小于3%，精密度良好，符合指纹图谱的检测要求。

表1 梯度洗脱程序

图1 高效液相色谱图

重复性试验:取同一批消癌平注射液，按2.1项下方法制备供试品溶液6份，并各吸取20 μL，按拟订色谱条件分别测定，记录色谱图。以绿原酸色谱峰(3号峰)为参照，计算10批供品试溶液各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。……