段朝霞 张洁元 陈魁君 王建民 李兵仓

1.创伤、烧伤、复合伤国家重点实验室，重庆 400042；2.第三军医大学野战外科研究所六室，重庆 400042

少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞，它的主要功能是产生髓鞘包绕神经轴突，维持神经冲动沿轴突跳跃性传导；另外它还分泌多种神经营养因子，支持神经元的生长与存活[1]。少突胶质前体细胞（oligodendrocyte precursor cells，OPCs）是处于分化早期阶段的未成熟细胞，具有良好的增殖能力，能在体内增殖、迁移，最后分化为成熟少突胶质细胞并为髓鞘形成发挥重要作用。高纯度OPCs的制备、培养是一切研究工作的基础，目前，国内外对大鼠OPCs的培养报道很多，有关小鼠OPCs的培养方法及研究报道还比较少，本文参照国内外文献报道的新生大鼠OPCs的培养方法[2-3]，探索小鼠OPCs的培养及鉴定，并研究重组巨噬细胞移动抑制因子（rMIF）对其增殖活性的影响，为进一步深入研究其发育、分化以及移植治疗脊髓损伤等奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器

高糖DMEM培养基、胎牛血清为Gibco产品，100 ×N2 添加物为Invitrogen公司产品，PDGF-AA及bFGF为Peprotech公司产品，山羊抗大鼠NG2 抗体、兔抗大鼠GFAP及MBP抗体均为BD公司产品，胰蛋白酶为Invitrogen产品，多聚赖氨酸及多聚鸟氨酸为Sigma公司产品，rMIF及拮抗剂ISO-1 为Sigma公司产品，MTT试剂盒为Sigma公司产品。倒置相差显微 镜 （Olympus）、 荧 光 显 微 镜 （Leica）、 酶 标 仪 （Thermo labsysytems）。实验动物为清洁级6～8周龄C57B6 小鼠，雌雄不限，体质量18～25g。由第三军医大学第三附属医院（所）实验动物中心提供。

1.2 混合胶质细胞的制备

实验之前，先将D-Hanks液预冷，取5～8 mL于10 cm无菌培养皿里，并将培养皿放于冰上。……