陈丹丹 杨晓芳 中国食品药品检定研究院 （北京 100050）

蓝域染色剂：含0.1%台酚蓝，用于白内障手术中前囊的染色，辨别撕囊时前囊和其下灰色、不着色的晶体组织。作为Ⅲ类医疗器械管理。作为评价医用生物材料生物学安全性指标之一的细菌内毒素试验，是检测其是否含有引起机体发热的内毒素的方法。细菌内毒素试验利用鲎的变形细胞与微量内毒素产生凝集反应的现象，来判断样品中细菌内毒素限量是否符合规定，具有简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。本文依据《中华人民共和国药典》2005年版附录XIE细菌内毒素检查法[1]的要求，考察蓝域染色剂细菌内毒素检查方法的可行性。

1. 材料与仪器

1.1 试剂

细菌内毒素检查用水（BET水）：批号：0802030，规格：25ml，生产单位：湛江安度斯生物有限公司。

细菌内毒素工作标准品：批号：2007-5，规格：100EU，生产单位：中国药品生物制品检定所。

鲎 试 剂：灵 敏 度：0.03EU/ml ， 批 号：0805082，规格：0.1ml，生产单位：湛江安度斯生物有限公司。

鲎 试 剂：灵 敏 度：0.03EU/ml， 批 号：08012221，规格：0.1ml，生产单位：福州新北生化工业有限公司。

1.2 样品

蓝域染色剂：批号：070507 ，规格：0.5ml/支，生产单位：德国飞龙公司。

1.3 仪器

电热鼓风干燥箱：型号：DL-101-2RS，生产单位：天津市中环实验电炉有限公司。

恒温水浴箱：型号：42 ，生产单位：北京市长风仪器仪表公司。

2.方法

2.1 试验准备

实验所用器材，经180℃烘烤3小时以上除去可能存在的外源内毒素。

2.2 鲎试剂灵敏度的复核

按《中华人民共和国药典》2005年版附录XIE细菌内毒素检查法复核鲎试剂灵敏度[1,2]，结果见表1。所用两个厂家的鲎试剂灵敏度为0.03 EU/ml，其灵敏度符合规定，可用于试验。

表1. 灵敏度复核结果

表2. 干扰预试验的测定结果

2.3 计算样品的最大有效稀释倍数

参照蓝域染色剂的企业标准，本品限值定为0.5EU/ml。目前市售鲎试剂灵敏度一般在0.5～0.03EU/ml,所以供试品在对应不同灵敏度鲎试剂时的最大有效稀释倍数分别为2倍、4 倍、8倍、16倍。

表3. 干扰试验的结果

2.4 干扰预试验

取样品原液，用BET 水制成2倍、4 倍、8倍、16倍系列稀释溶液[3]，用此系列稀释溶液作溶剂，稀释内毒素工作标准品，以制成含细菌内毒素工作标准品2λ浓度的内毒素溶液，用两个厂家灵敏度为0.03EU/ml的鲎试剂进行试验，同时做阳性和阴性对照（试验结果见表2）。结果表明，样品的低倍稀释液对细菌内毒素试验有抑制作用，在8倍或16倍稀释后有可能排除干扰。

表4. 蓝域染色剂的细菌内毒素检查结果

2.5 干扰试验

进行试验（试验结果见表3）。结果表明，Es均在0.5λ～2.0λ，Et均在 0.5Es～2.0Es，说明样品 16倍稀释液对细菌内毒素试验无干扰作用，该产品可以采用细菌内毒素检查法控制其质量。

按《中华人民共和国药典》2005年版附录XIE进行干扰试验[4]，分别用BET水及样品16倍稀释液将细菌内毒素工作标准品配制成浓度为 0.06、0.03、0.015、0.0075EU/ml的溶液，同时用BET水和样品16倍稀释液各做两管阴性对照，用两个厂家灵敏度均为0.03EU/ml的鲎试剂

2.6 样品检测

取样品16倍稀释液，用灵敏度为0.03 EU/ml的鲎试剂按中国药典进行细菌内毒素检查（结果见表4）。结果表明，该产品的细菌内毒素检查是符合规定的，即样品中的细菌内毒素含量小于0.5EU/ml。

3.讨论

本文先根据公式计算出蓝域染色剂的有效稀释倍数，先进行干扰实验的预试验推测无干扰的稀释浓度，再由正式的干扰试验进行验证，从而减少试验的盲目性，避免浪费试剂并且节省时间。由于样品对细菌内毒素检查法存在抑制性干扰，实验结果证实此干扰作用可通过稀释原液16倍的方法而消除。试验结果还表明，蓝域染色剂的细菌内毒素含量小于0.5EU/ml，该产品的细菌内毒素检查是符合规定的。该产品可以用细菌内毒素检查法来控制样品中的细菌内毒素含量。

[1]中国药典，2005年，二部附录XIE：85～ 88

[2]张逸，鲁双云，高文娟等.建立可吸收医用膜细菌内毒素检查的新方法.现代预防医学，2007，34，（18）：3442～3446

[3]冯智敏，江肖明，黄得坤.碳酸氢盐人工肾透析液的细菌内毒素检测.广东药学院学报，2005，2（3）：274～278

[4]杨勇.葛根素注射液细菌内毒素检查方法的研究.安徽卫生职业技术学院学报，2005，4（4）：52～53