谢丽基，谢芝勋，刘加波，庞耀珊，邓显文，谢志勤，范 晴

（广西壮族自治区兽医研究所，广西南宁 530001）

鸭I型肝炎病毒（duck hepatitis virus Type I，DHV I）是雏鸭的一种高度致死性的病毒性传染病的病原[1]。该病主要侵害4周龄以内的雏鸭，死亡率高达90%以上，是危害养鸭业最为严重的传染病之一。番鸭细小病毒（Muscovy duck ling parvovirus，MDPV），是危害番鸭养殖的重要病原，可引起1～3周龄雏番鸭发病，致死率达到50%～80%[2]。这两种病毒是雏鸭最易感并且致死率也非常高的病毒。

目前，这两种病毒的传统检测方法有血清中和试验、琼脂扩散试验和ELISA等[3-6]，但这些检测存在耗时长、敏感性较低、不易标准化等缺点，在实际应用中具有一定的局限性。现已建立的鸭I型肝炎病毒 RT-PCR[7]和番鸭细小病毒PCR[8]检测方法，检测的速度和敏感性优于传统的检测方法。

二重RT-PCR实现了一管二检的目的，具有高通量、低成本、高效率等优点。目前，还未见有应用二重RT-PCR技术对鸭I型肝炎病毒和番鸭细小病毒进行检测和诊断的报道，本研究设计了多对引物，建立了鸭I型肝炎病毒和番鸭细小病毒二重RT-PCR快速检测方法，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂 病毒RNA/DNA快速纯化试剂盒和One Step RT-PCR试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；PUM-T试剂盒和DNA片断胶回收试剂盒购自广州东盛生物科技有限公司。PCR仪为美国Per k in Elmer Cetus公司生产的PE9600仪。

1.2 病毒株 鸭I型肝炎病毒 AV2111株购自中国兽医药品监察所；番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、小鹅瘟病毒、鸭副黏病毒、鸭瘟病毒和H9亚型禽流感等由本实验室保存。

1.3 二重RT-PCR方法的建立