李红梅 ，侯玉杰 ，，时成龙 ， ，郭 巍 ，胡 兰 ，赵立平 ，相文华

（1.中国农业科学院 哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室/马病研究中心，黑龙江哈尔滨 150001；2.沈阳农业大学 畜牧兽医学院，辽宁沈阳 110161）

马病毒性动脉炎（equine viral arteritis，EVA）是由马动脉炎病毒（equine arteritis virus，EAV）引起的马属动物呼吸和生殖系统病毒性传染病。该病在马属动物之间通过呼吸道或生殖器官传播。其临床特征是病马发热，步态僵直，躯干及眼周围水肿，出现粘液-脓性鼻炎，外生殖道水肿，妊娠马流产[1]。

目前，在EAV血清抗体检测上，主要有间接免疫荧光（IFA）、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）、中和试验（SN）和多种酶联免疫吸附试验（ELISA），其中 ELISA 是最为常用的方法[1-2，6，9]。

中国未有检测EAV的诊断试剂，在国际贸易上主要采用国外诊断试剂盒进行检验检疫，至于在役用马检测或监测上，我国未见有报道。为此，本试验建立以纯化EAV全病毒为抗原EAV-IgG间接ELISA方法，与西班牙INGEZIM-ARTERITIS试剂盒进行比对试验，以求建立我国的EAV的诊断方法。

1 材料与方法

1.1 样本 383份马血清，其中华中赛马41份，西北役用马106份，华南赛马127份和东北役用马109份。抽检马为临床健康，无EAV疫苗免疫历史的马，其自然状况信息见表3、表4。血清样本制备，采用静脉采血，37 ℃孵育1 h，4 ℃过夜，收集血清。

1.2 检测试剂 EAV-IgG间接ELISA试验（本试验建立）和西班牙INGENASA公司的INGEZIM-ARTERITIS试剂盒，EAV标准阳性、阴性血清均由本实验室保存。

1.3 主要试剂 可拆卸酶标板，购自加拿大JET公司；Anti-horse IgG购自Sigma公司。

1.4 EAV-IgG间接ELISA试验

1.4.1 病毒株 EAV Bucyrus株（云南热带和亚热带动物病毒病实验室张念祖教授惠赠）。

1.4.2 抗原制备 EAV Bucyrus株接种于已长成单层的RK-13细胞，吸附30 min后用含2%血清的MEM维持液于37 ℃，5% CO2条件下培养。……