张 康 ，龚振华 ，李 蕾 ，王洪伟 ，李玉清 ，张丽娟 ，王丽萍，庄青叶，于建敏，李金平，刘国庆

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2.青岛易邦生物股份有限公司，山东青岛 266032；3.诸城市畜牧兽医管理局，山东诸城 262200；4.胶南市兴牧科技服务中心，山东胶南 266400）

鸡弯曲菌病又称为鸡弧菌性肝炎，主要由空肠弯曲菌感染引起的幼鸡或成年鸡传染病。本病以肝出血坏死性肝炎伴发脂肪浸润，主要呈慢性经过为特征，影响鸡的生产性能，可以给养鸡业造成较大的经济损失。传统的细菌学分离方法是检测鸡弯曲菌病的主要方法[1]，但因该菌培养需要微厌氧培养系统、营养条件苛刻、增菌分离及生化鉴定所需时间长，使得该方法在实际操作中显得非常繁琐与不便。临床实践中，有时需要采用空肠弯曲菌快速检测方法进行临床诊断。近年来，PCR检测方法以其特异性强、灵敏度高和快速简便等优点，已经在鸡弯曲菌病的检测中得到了广泛的应用[2-5]。我们采用Nested-PCR方法，对某鸡场发生的空肠弯曲菌感染鸡进行了快速诊断研究，现将结果报告如下。

1 材料

1.1 PCR对照样品

阳性对照样品：空肠弯曲菌（ATCC33560）由中国动物卫生与流行病学中心保存。

阴性对照样品：市场上购买的健康鸡肝组织。

1.2 引物

采用高正琴等[6]报道的2对针对弯曲菌fl a A区的 Nested-PCR 的 引 物，F1：5'-GGAGGATCCATGGGA TTTCGTATTAAC-3'；R1：5'-TTTGGATTCCTACTGT AGTAATCTTAA-3'。F1+R1 扩 增 长 度 为 1 719 bp。F2：5'-ATGAAAGAAAACTATGGCCG CTTGTCT-3'； R2：5'-AGTCTACATCACGGATTTG CGATTCTG-3'，F2+R2扩增长度为640 bp。

1.3 其他试剂

1.3.1 生化试剂 Taq酶、buffer、dNTPs、DNA Mar k er（均为大连宝生物工程公司）。

1.3.2 样品保存液 商品化DNA保存液（北京康为世纪生物科技有限公司）。

1.3.3 核酸纯化试剂盒 微量DNA快速纯化试剂盒（VWI产品）。……