颜梅新，黄伟华，邓展云，黄诚华，韦金菊

（广西壮族自治区甘蔗研究所/广西甘蔗遗传改良重点实验室，南宁 530007）

甘蔗花叶病毒（Sugarcane mosaic virus，SCMV）引起的甘蔗花叶病是重要的甘蔗病害之一，在我国浙江[1]、福建[2]、广东[3]、广西[4]、云南[5]等地甘蔗产区普遍发生，为害严重。国内外对SCMV特性、分类地位、多样性等方面进行了研究，迄今，报道了200多个SCMV分离物CP基因序列，有的还进行全基因组序列测定[6-8]，许东林等2005年对华南地区引种基地侵染甘蔗的SCMV遗传多样性进行报道[3]。广西是SCMV的主要发生地区之一，但至今尚未对全区甘蔗品种品系间感SCMV进行调查，为此我们进行了相关研究。本文简要报道广西蔗区侵染甘蔗SCMV的初步调查结果。

1 材料与方法

1.1 样品采集与总RNA提取

从广西各主要蔗区采集不同品种（品系）显症的甘蔗样品，以茎尖组培脱毒的健康植株叶片作为阴性对照。采用天根生化科技（北京）有限公司的RNAprep pure植物总RNA提取试剂盒抽提叶组织总RNA，具体步骤参考试剂盒说明书。

1.2 RT-PCR扩增

RT-PCR 扩增引物根据文献[9]合成，上游引物 SCMVF4 （5′-GTTTTYCACCAAGCTGGAACAGTC-3′；Y=C or T），下游引物 SCMVR3 （5′-AGCTGTGTGTCTCTCTGTATTCTC-3′），预期扩增产物约 700 bp。RT-PCR 用购自宝（大连）生物工程有限公司的PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2试剂盒进行，反应体系参照试剂盒说明，RT 体系：50μL 反应体系中总 RNA 约 0.08μg/μL、PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2 μL、2×1 Step Buffer 25 μL、引物 SCMVF4 和 SCMVR3（20 μM）各 1 μL ，用 DEPC ddH2O 补足 50 μL。 反应程序为：45℃30min；95℃ 2 min；94℃ 1min，60℃ 1min，72℃ 1min，35 个循环；72℃ 5min。 PCR 反应结束后， 扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳，在UVP凝胶成像系统中观察检测结果。对部分RT-PCR产物直接送测序和BLAST比对，验证检测结果的正确性。

1.3 感病品种（品系）调查

2010年5—10月间先后从广西甘蔗研究所、驮卢、凭祥、柳州、柳城、鹿寨、百色、贵港等甘蔗主产区采集不同品种（品系）显症甘蔗样品进行SCMV RT-PCR分子检测。……