金 涛，张 英，任 玮，张艳杰，张 晖，钱海峰，齐希光，王 立，*

(1.江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122;2.中国食品发酵工业研究院，北京100027)

抗冻蛋白(Antifreeze Proteins，AFPs)又叫热滞蛋白(Thermal Hysteresis Prioteins，THPs)，最显著的特性是其具有热滞活性(Thermal Hysteresis Activity，THA)［1］，能够降低水溶液的冰点，但对熔点的影响较小，从而导致水溶液的熔点和冰点之间出现一定的差值。另外，AFPs还具有其他两个重要特征:冰晶形态效应和重结晶抑制效应［2］。有关抗冻蛋白的研究主要集中于动物抗冻蛋白方面，最先从鱼类中发现抗冻蛋白［3］;对于植物抗冻蛋白的研究相对较少，而像燕麦籽粒这样具有较硬外壳的、不易提取的研究更少。本研究对真空渗透离心法提取燕麦质外体抗冻蛋白进行了探索。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

燕麦 购自于当地超市;六磷酸葡萄糖(G6P)、NADP·Na4、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、磷酸二氢钠(NaH2PO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)、柠檬酸 分析纯;缓冲液 Tris-HCl;PBS，Na2HPO4-柠檬酸(pH7.4;50mmol/L Na2HPO4∶25mmol/L 柠檬酸溶液(v/v)=18.17∶1.83)。

DSC-7差热分析仪 Perkin Elmer Pyris;UV7504紫外光分光光度计 上海市实验仪器总厂。

1.2 实验方法

1.2.1 质外体蛋白的提取 提取方法参考Smallwood等［4］报道的方法，实验中略微做了改动。低温下保存的燕麦用去离子水冲洗3次后，用滤纸吸取表面多余的水分，将燕麦装入烧杯，用3倍体积预冷的缓冲液(50mmol PBS，pH8.0)浸泡一定时间，再将烧杯放入真空干燥器中，抽真空至一定真空度。维持一段时间后，将气压缓慢恢复到正常大气压水平，室温下放置5min，让多余的提取液流出。用滤纸轻轻吸干，然后将燕麦放入合适的离心管中，离心，上清液再通过高速旋转冷冻离心机10000r/min离心15min，上清液即为燕麦质外体蛋白提取液。……