体外诱导人羊膜上皮细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究*

2012-08-30赵玉洁陈代雄余丽梅喻皇飞赵春华

中国应用生理学杂志 2012年2期

赵玉洁,方宁,陈代雄△,余丽梅,喻皇飞,赵春华

(1.遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室,贵州遵义 563003;2.中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心,北京 100005)

近年来的研究表明,人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,hAECs)具有多谱系分化特性、低免疫原性、扩增能力强、来源丰富、易于富集、不牵涉医学伦理问题等优势[1,2],在再生医学中具有潜在的应用前景。已有研究证明,hAECs在适宜条件下,能够向神经元样细胞、肝细胞样细胞、心肌细胞样细胞、成骨细胞、内皮细胞、胰岛β细胞样细胞等分化[1,4]。本实验探讨hAECs在体外诱导条件下向胰岛素分泌细胞(insulin secreting cells,ISCs)分化的能力,为其作为治疗Ⅰ型糖尿病新的细胞供源提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 人羊膜

经产妇知情同意,无菌剥离健康足月剖宫产胎盘之羊膜。

1.2 主要试剂

LG-DMEM、HG-DMEM、胎牛血清、N2补充物均购自Gibico公司,胰蛋白酶购自Amreseo公司,尼克酰胺和鼠抗人波形蛋白单克隆抗体购自Sigma公司,鼠抗人角蛋白19(Cytokeratin19,CK19)单克隆抗体和ChemMataTMDAKO EnvisionTM Detection Kit购自Gene Tech公司,兔抗人胰岛素单克隆抗体购自Cell Signaling technology公司,鼠抗人 β2微球蛋白(β2-MG)单克隆抗体购自Santa Cruz Biotechnology公司,流式细胞检测试剂均购自BD公司,[125I]胰岛素放射免疫分析药盒购自北京科美东雅生物技术有限公司,RNAisoTMPlus,mRNA Selective PCR Ver.1.1购自TaKaRa公司,引物均由上海生物工程有限公司合成。