苏海英,莫碧文,韦江红,黄剑伟,王昌明,曾锦荣,徐 青,林 云(广西桂林医学院附属医院呼吸内科,桂林 541001)

支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞包括气道的炎性细胞和结构细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病,气道上皮作为气道内的物理屏障,在气道局部微环境稳态维持中发挥重要作用。气道上皮细胞受到各种损伤因素作用后,不仅其屏障及保护作用减退,还会释放多种前炎因子,通过自分泌、旁分泌作用,在气道重塑的形成及发展过程中发挥重要作用。近年研究显示,上皮细胞源性细胞因子可诱导气道平滑肌细胞向气道管腔方向迁移,从而进一步参与气道重构,但其确切机制尚未可知。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是新近发现的细胞跨膜受体,已有研究显示其与哮喘密切相关。TLR4与多种细胞的跨膜迁移均相关,但其与气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)跨膜迁移是否相关,目前尚未见报道。

由于正常ASMCs和哮喘ASMCs的表型和功能状态存在差异[1],故用培养正常ASMCs来研究哮喘相关生物学机制的方法存在一定的局限性。本实验拟通过建立大鼠哮喘模型,直接培养哮喘大鼠ASMCs,以抗TLR4抗体作为工具药,探讨TLR4在上皮细胞诱导的哮喘ASMCs跨膜迁移中的作用,为寻找哮喘的治疗方法提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料和仪器

SPF级SD大鼠(雄性,200±20 g)由广西医科大学实验动物中心提供。RTE上皮细胞株(中国医学科学院);DMEM培养基、胰蛋白酶、胎牛血清(FBS)(美国GIBCO公司);卵清蛋白(OVA,美国Sigma公司);TLR4抗体(武汉博士德生……