王珅 方志强

肝硬化(hepatic cirrhosis，HC)发展过程中常伴随肠黏膜屏障的损伤［1］，肠道内大量细菌向肠腔外移位，可引起全身炎性反应综合征和多器官功能衰竭［2］。因此，重建肠道屏障的完整性在肝硬化治疗中显得尤为重要。血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)是血红素代谢中的限速酶，炎症等刺激可诱导其表达，具有细胞保护作用［3］。本实验通过建立四氯化碳(carbon tetrachloride，CCl4)致大鼠肝硬化动物模型，观察HO-1诱导对肠黏膜屏障的保护作用。

1 材料与方法

1.1 试剂 FITC-葡聚糖、钴原卟啉(cobalt protoporphyrin，CoPP)(Sigma公司);小鼠抗大鼠Bcl-2一抗及山羊抗小鼠二抗(Santa Cruz公司);小鼠抗大鼠β-actin单克隆抗体(Cell Signaling Technology公司);ELISA试剂盒(BioSource公司);BCA蛋白浓度测定试剂盒、脂质氧化(MDA)检测试剂盒及TUNEL试剂盒(碧云天公司)。

1.2 肝硬化动物模型的建立 建立肝硬化动物模型的方法参照文献［4］，简述如下:选取健康雄性 Wistar大鼠40只(山西医科大学实验动物中心提供)，体重210～240 g，随机分为2组:control组(n=8):以正常饮食喂养;HC组(n=32):建模第一天，大鼠背部皮下注射CCl4原液(5 ml/kg)。以后每隔3日，皮下注射40%的CCl4橄榄油溶液(3 ml/kg)。饲料前两周为79.5%玉米面、20%猪油及0.5%胆固醇，从第三周起为99.5%玉米面与0.5%胆固醇，10～30%饮用酒为其唯一饮用水。六周末可形成HC。建模中HC组病死率为34.4%(11/32)，对照组无死亡。

1.3 诱导HO-1表达 在HC组中随机选取10只大鼠诱导HO-1表达，为HC+HO组。实验方法参照文献［5］，简述如下:HC+HO组大鼠每周两次皮下注射CoPP(1.5 mg/kg)，共两周。作为对照，control组与HC组均注射NaOH溶液(0.1 mol/L，pH 8.3)。

1.4 肠黏膜通透性检测 将大鼠麻醉后开腹手术，仔细分离出距回盲瓣5 cm处的下段回肠10 cm，两端以棉线扎紧。将浓度为2 g/L的FITC-葡聚糖注入该肠段至充盈。……