TRAIL联合顺铂诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的作用

2012-08-22郑中华于洪泉丁丽娟赵丽微

中国老年学杂志 2012年24期

关键词：肺癌

郑中华国巍于洪泉郭敏丁丽娟赵丽微齐玲

(吉林医药学院病理学教研室，吉林吉林 132013)

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是体内天然的抗肿瘤药物，可由人体的免疫系统正常表达，目前在美国TRAIL已进入临床Ⅱ期研究阶段〔1〕。本课题组在以往研究中发现，TRAIL在胶质母细胞瘤诱导凋亡过程中，发生凋亡抵抗而不能引起肿瘤细胞凋亡〔2〕。因此，本文将研究TRAIL和化疗药物顺铂对非小细胞肺癌细胞联合诱导凋亡的作用，为TRAIL作为新药开发提供更进一步的理论依据，此方面研究国内还未见相关报道。

1 材料与方法

1.1 细胞培养从液氮中取出冻存的非小细胞肺癌细胞H596细胞株，37℃水浴后离心弃上清，将细胞用含10%小牛血清的RPMI 1640(美国Gibco公司)培养液，在37℃，5%CO2及饱和湿度下培养，隔日换液，1∶3传代。

1.2 TRAIL和顺铂作用细胞后细胞死亡率检测〔3〕待细胞生长至90%时，用0.25%胰酶消化成单细胞悬液，以每孔8×103个细胞密度种于96孔培养板中，培养24 h后单独加入rhTRAIL(英国Peprotech公司，药物终浓度分别为0、0.01、0.1、1、10和100 ng/ml)或与10μg/ml顺铂联合作用，24 h后弃上清，0.01 mol/L PBS洗板，加入新鲜配制的酸性磷酸酶底物检测溶液(上海生物工程技术公司)100μl，继续培养90 min，每孔加入0.1 mol/L氢氧化钠10μl室温孵育5 min。酶标仪405 nm处测定各孔吸光度(A)值，计算细胞死亡率 =(1－100 ×A405测定组/A405对照组)×100%。

1.3 统计学分析采用SPSS17.0软件进行分析，结果以x±s表示，采用t检验。