侯燕军 张雷 吴启龙 薛利利

分子靶向和免疫治疗在治疗肿瘤方面取得了重大疗效，常用于肺癌的治疗。由于吸烟，空气污染，电离辐射等因素影响，肺癌的发生率及死亡率逐年上升肺癌占所有癌症致死人数的比例超过1/5，并有上升趋势[1]。本实验旨在探索生物免疫治疗与分子靶向治疗的协同关系现报道如下:

1 材料与方法

1.1 材料 吉非替尼(国药准字J20100014)由阿斯利康公司提供;A549人类肺腺癌细胞株由上海研生生物工程有限公司提供;DC-CIK共同培养为我细胞培养室自制，培养基为RPMI-1640由Hyclone提供;MTT仪器为上海华舜生物工程有限公司提供;胎牛血清由杭州四季清公司提供;Annexin-V/FIFC试剂盒由南京凯基生物科技有限公司提供。

1.2 实验方法

1.2.1 DC-CIK制备 采集健康志愿者外周血离心获得单个核细胞。反复冻融裂解法制备抗原。室温下培养3h后贴壁者做DC细胞培养，未贴壁者做CIK细胞培养。培养第9天以DC/CIK=1:5进行混合培养。

1.2.2 A549细胞培养 用Hyclone提供的含10%胎牛血清RPMI/1640的培养液于37℃、5%CO2及饱和湿度的条件下培养A459细胞，2 d/次换液。细胞成片后作1/2传代。

1.2.3 细胞抑制率测定 将对数期生长的A549细胞用MTT法计数后种于96孔板内，标准为每孔0.5×105。分为DC-CIK组、吉非替尼组、DC-CIK联合吉非替尼A、B组(A组吉非替尼6.9umol/L;B组非替尼13.8umol/L)，培养24h待A549细胞贴壁，取出培养板，去除培养液，洗涤2～3次后，碱化标本，在570nm处测定OD值，每组实验取4孔求平均值，根据添加药物前后细胞计数的变化计数每组的抑制率。

1.2.4 细胞周期及凋亡情况测定 ①细胞凋亡测定:取对数生长期细胞，接种于6孔……