鹿理友 于传亭 辛志玲

肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，具有发展迅速，侵袭性强，恶性程度高，预后差等特点[1]。虽然手术技术的提高，治疗有了很大的提高，但发现时往往已至晚期，手术效果不理想。基因表达水平的改变是细胞癌变的一个重要因素。近几年发现和发展起来的RNA干扰技术，是一种新兴基因阻断技术，同源性mRNA的降解通过内外源性双链RNA触发，从而使该基因表达沉默。人体正常组织及细胞中有STATs少许表达，正常的生理功能得以维持。但持续性的激活在肿瘤组织及细胞中却表现出来[2]，被认为是潜在的肿瘤抑制因子。其中以sTAT3尤为活跃，现多认为其可促进肿瘤细胞的凋亡[3]。本研究观察stat3-siRNA表达质粒在治疗AFP阳性肿瘤基因中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 RPMI 1640培养基购自Invitro-gen公司;无内毒素质粒提取试剂盒购自Qiagen公司;转染试剂购自大连宝生物公司;电脉冲仪为德国ECM 630;电击杯购自Bio-Rad生物公司;细胞总RNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司);反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-p01ymerase chain reaction，RT-PCR)试剂盒购自TAKARA公司;人肝癌细胞株HepG2为本室保存。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 常规方法接种于1640新鲜培养基复苏的肝癌细胞株 HepG2，于37℃，5%的 CO2培养箱中培养，含10%小牛血清，含均100 U/ml双抗青霉素、链霉素，G418浓度为400ug/ml，传代培养用0.25%的胰蛋白酶消化，观察是否为细胞对数生长期，备实验用。

1.2.2 质粒DNA的扩增与抽提 由上海生物工程技术有限公司合成的长度为350 bpPCR产物，引物序列如下:βactin sense: 5'GCACCACACCTTCTACAATG 3'; antisense:5'GTGGTGAAGCTGTAGC3'。根据美国国立卫生图书馆基因库中人STAT 3 mRNA序列(NM 31500)合成其引物……