李 静，夏正坤，高远赋，樊忠民，刘梦原，高春林，何 旭，史 卓

0 引 言

FK506是从链霉菌属培养物中分离得到的新型大环内酯类免疫抑制剂，临床上广泛用于肝、肾、心等器官移植后的抗排斥反应中。近年来，FK506应用于临床难治性肾病的治疗，取得了理想的治疗效果。难治性肾病主要的临床表现之一是持续性大量蛋白尿。蛋白尿不仅提示肾小球的损害程度，而且可能导致肾小管间质损害，可引起肾小管上皮细胞凋亡和肾小管间质纤维化［1］。尿蛋白的主要成分是白蛋白，是引起肾小管上皮细胞凋亡的重要原因［2－4］。蛋白尿作为众多肾脏疾病的共同特点，严重损害肾脏的滤过和重新收功能，加速疾病的进展。但是蛋白尿引起肾小管间质损害的具体机制仍不明确，目前缺乏有效的预防和治疗措施。研究发现，大剂量白蛋白超载可促进近端肾小管上皮细胞(proximal tubular epithelial cell，PTC)凋亡［5－6］。本研究观察FK506对d-BSA超载的NRK-52E细胞凋亡率的影响，以进一步探讨白蛋白对NRK-52E细胞的损害机制及FK506可能的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料 NRK-52E细胞(上海中科院细胞库)，d-BSA(Excell公司)，FK506(日本藤泽公司)，DMEM低糖培养基(美国Hyclone公司)，MTT(凯基公司 )，JC-1(美国 Invitrogen公司)。

1.2 细胞培养及爬片 NRK-52E细胞培养于含10%胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)和100 U/ml青链霉素的DMEM低糖培养基中传代培养，条件为37℃、5%CO2的细胞培养箱中。

取对数生长期的NRK-52E细胞，0.25%胰酶消化，用含10%FBS的DMEM低糖培养基调整细胞浓度至1×105/ml，接种于96孔培养板，每孔200μl细胞悬液，于37℃、5%CO2培养箱中培养。细胞贴壁生长呈亚融合状态，更换无血清DMEM低糖培养基培养24 h，使其同步化。……