青海西宁藏獒巴贝西虫病的血清学调查
2012-08-07马利青王戈平衣翠玲蔡其刚叶成玉牛小迎李晓卉
马利青,王戈平,衣翠玲,蔡其刚,陆 艳,叶成玉,牛小迎,李晓卉
(青海省畜牧兽医科学院,青海 西宁 810016)
吉氏巴贝西虫(Babesia gibsoni)是一种蜱媒传播血细胞性原虫,能够导致犬的巴贝西虫病。急性病例最常见的临床症状为发热、贫血、黄疸、食欲不振、饥渴、孱弱、虚脱,通常导致死亡[1]。幼龄犬和老龄犬对B.gibsoni都易感,但是幼龄犬更易感,感染后症状更严重[2]。犬B.gibsoni的诊断主要是基于血涂片的红细胞内的B.gibsoni虫体的检查。然而,由于寄生虫血症水平低,其不适用于检测隐形或慢性感染,有时在红细胞内发现B.gibsoni虫体是非常困难[3]。基于感染红细胞作为抗原的间接荧光抗体检测(IFAT)或者酶联免疫吸附试验(ELISA)在B.gibsoni诊断中也具有一定的特异性[4-5]。因此,利用B.gibsoni特异性抗原建立可靠的、敏感的和特异的检测方法是非常必要的。
寻找用于作为犬B.gibsoni诊断抗原的焦点集中在免疫优势抗原的鉴定,这些抗原能够被来自于地理区域隔离较远、急和慢性感染的犬的血清所识别。最近,Fukumoto等已经鉴定了一个新的基因,该基因编码B.gibsoni的主要免疫抗原P50,并对其在ELISA中的诊断潜力做了评估[6-7]。利用大肠杆菌表达重组全长的P50(P50f)作为抗原的ELISA方法能够显著区分B.gibsoni和B.canis感染犬或未感染的犬[7]。由于重组的P50f几乎完全以不溶性的形式表达,有限的抗原的供应阻碍了本ELISA方法的使用。为了解决这个问题,在本次调查中通过去除高疏水性的信号肽和跨膜区在大肠杆菌中表达了可溶性的P50,并评价了其在ELISA中的诊断潜力。
1 材料与方法
1.1 重组的B.gibsoni GST-P50t 蛋白在以前的研究中进行了克隆、表达和纯化[6];……
