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白藜芦醇对老年大鼠心肌细胞线粒体细胞色素C氧化酶表达的影响

2012-08-04夏立志胡秋玲哈尔滨市二四二医院黑龙江哈尔滨150066

中国老年学杂志 2012年13期

夏立志 胡秋玲 (哈尔滨市二四二医院,黑龙江 哈尔滨 150066)

随着人口老龄化,提高老年人的生活质量,延缓衰老一直是医学界研究的热点。线粒体在进行有氧呼吸时,伴有自由基的产生,将引起衰老。因此,清除自由基、保护线粒体的天然药物对于抗衰老发挥重要作用〔1〕。白藜芦醇对动脉粥样硬化有保护作用,具有清除自由基、抗脂质过氧化等作用〔2〕,但白藜芦醇对老年大鼠心肌线粒体能量代谢的影响未见报道。本实验旨在为抗衰老药物开发提供实验依据,同时为老年心脏病患者的康复奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物 纯系雄性SD大鼠30只,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供,3月龄大鼠10只作为青年组,体重(300±41.5)g;24月龄大鼠20只,体重(700±83.5)g,随机分为老年组和用药组,每组10只。室温饲养,自由饮食。

1.2 药物与处理 白藜芦醇由本实验室从虎杖中提取(99%,HPLC),白藜芦醇标准品由 sigma公司提供,实验时用蒸馏水配成混悬液。用药组每日予白藜芦醇(70 mg/kg)连续灌胃4 w。每周称重2次,根据体重调整剂量。青年组和老年组均灌胃等容量生理盐水。

1.3 指标测定

1.3.1 心肌线粒体的提取 给药4 w后断髓处死。迅速取出心脏,一部分液氮冻存,用于提取组织 RNA。另外部分剪成小块后立即用介质Ⅰ(0.25 mol/L蔗糖溶液,3.0 mmol/L HEPES,0.5 mmol/L EDTA,pH7.4)去除血污,用滤纸吸去表面的液体,称重,匀浆,600 r/min离心5 min,取上清液于10000 r/min离心10 min。沉淀用介质Ⅱ(0.25 mol/L蔗糖溶液,2.0 mmol/L HEPES,0.5 mmol/L EDTA,pH7.4)悬浮,10000 r/min 离心10 min,沉淀悬浮在0.5 ml介质 Ⅱ 中,制备成线粒体悬液备用〔3〕。另一部分线粒体悬液经超声波粉碎机粉碎,400 A,5 s/次,间隙 10 s,反复 4次使线粒体微粒破碎,4℃ 离心(2000 r/min,10 min),取上清液供酶活力测定。……

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