胡 俊 陈旭辉 吴 军 (北京大学深圳医院神经内科，广东 深圳 518035)

重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)是丝氨酸蛋白酶家族的一员，主要作用是激活纤溶酶原转变为纤溶酶。rt-PA对血栓的选择性高，半衰期短，无抗原性，是迄今为止唯一被美国FDA批准用于急性脑梗死的溶栓药物，可溶解血栓，早期开通闭塞的血管，恢复血供，减少脑组织损伤。欧美国家相继开始了rt-PA静脉溶栓治疗急性脑梗死的大规模、多中心、随机对照实验〔1，2〕。但是，由于rt-PA静脉溶栓治疗时间窗只有3 h，极大地限制了其在临床上的应用。近年有研究表明，rt-PA除了参与溶栓过程之外，还可能参与血脑屏障(BBB)后期的血管生成、神经生成和轴突再生〔3，4〕。本研究拟探讨rt-PA对BBB氧糖剥夺(OGD)后神经细胞的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、rt-PA、血管内皮生长因子(VEGF)、小牛血清(FCS)、胰蛋白酶、马血清、考马斯亮蓝、甘氨酸、丙烯酰胺、MTT、相差倒置显微镜、振荡器、酶联免疫检测仪、紫外可见分光光度计TU-1810D等。

1.2 方法

1.2.1 HUVEC细胞培养 细胞株用含有10%FCS的RPMI-1640培养液，在37℃、5%CO2培养箱培养。细胞贴壁生长，细胞呈菱形。当细胞接近70%～80%融合时以0.25%胰酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化液消化后传代。HUVEC细胞浓度取2×105/ml用于各项实验。

1.2.2 海马神经元原代培养 海马神经元取自C57BL/6新生鼠，75%乙醇消毒，取出大脑置于冷的Hanks平衡盐溶液中，迅速剥离分出两侧海马组织，转移至0.25%的胰酶中37℃消化15 min。血清终止消化，1 500 r/min，4℃离心10 min以沉降组织。用冷的10%DMEM清洗组织一次，离心后重悬，吹打使组织成单细胞悬液，调整细胞密度为5×104/ml。接种于多聚鸟氨酸处理的培养瓶、24孔板与96孔板中。……