杜海军 王 湛 尉秀霞 周 玲* 马 晶 冯 霞 叶树清 曾 毅*

（中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所，传染病预防与控制国家重点实验室，北京100052）

树突状细胞（Dendritic cell，DC）是1973年美国洛克菲勒大学的Steinman和Cohn教授从小鼠的外周淋巴器官首次发现的[1]，是体内功能最强的专职抗原提呈细胞（Antigen present cell，APC），也是唯一能激活初始型T细胞的APC，被称为天然“免疫佐剂”，在抗感染、抗肿瘤、移植排斥等过程中发挥重要作用[2]。目前以DC为基础的疫苗在治疗肿瘤方面，尤其在某些晚期肿瘤等的临床治疗方面已经取得一些的成效[3-7]。鼻咽癌（Nasoparyngeal carcinoma，NPC）是我国南方一些省（自治区）的常见恶性肿瘤之一。目前放射治疗是鼻咽癌治疗的基本方法，但中晚期鼻咽癌治疗后常常复发或向远处转移，对于复发和转移的患者在临床上尚无有效治疗方案。EBV-LMP2是NPC细胞表达的病毒抗原之一，是诱导特异性免疫应答的理想靶抗原。以DC为基础的疫苗其免疫方式报道多为静脉回输、淋巴结注射和皮内（下）注射[8-11]。我们以肌肉免疫方式注射DC-EBV-LMP2，研究LMP2诱导的特异性CTL。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

Balb/C鼠购自军事医学科学院实验动物中心。优级胎牛血清购自Invitrogen公司。rAd-LMP2：深圳清华源兴生物医药科技有限公司生产。LMP2单抗购于SantaCruz公司；荧光标记羊抗鼠IgG及HRP标记羊抗兔IgG购自北京中衫生物技术公司；流式检测抗体购自Biolegend公司；重组小鼠细胞因子购自Peprotech公司；ELispot Kit购自BD公司；细胞培养液由病毒病预防控制所配液室提供。

1.2 小鼠骨髓细胞分离与DC的诱导培养

断颈法处死小鼠，取出小鼠股骨骨髓，制成成单细胞悬液，以小鼠淋巴细胞分离液（达科为）分离骨髓细胞（2000rpm/min，30min）。……