王 原 余亮科 房 芳 赵 辉 潘 涛 杜改萍

(河北联合大学附属医院消化科，河北 唐山 063000)

吉非替尼(Gefitinib)是一种选择性表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，可妨碍肿瘤的生长、转移和血管生成，并增加肿瘤细胞的凋亡。目前吉非替尼主要用于治疗中晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)，但有一定的毒副作用，包括胃肠道反应，如恶心、呕吐及腹泻等，一定程度上影响患者的生活质量〔1〕。有报道称中药紫龙金片能在一定程度上减轻化疗的副作用〔2〕。本研究拟探讨紫龙金片能否通过抑制吉非替尼诱发的肠道通透性增加而改善胃肠道反应。

1 材料与方法

1.1 实验材料 电阻仪ESR-001(密理博，北京);结肠腺癌细胞Caco-2细胞株(购自中国医学科学院基础医学研究所);胎牛血清(Gibco，美国);Transwell培养板(Cornig，美国);甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体、核转录因子(NF)-κB p65抗体(美国Santa Cruz公司)。

1.2 方法

1.2.1 构建肠上皮细胞屏障模型 Caco-2细胞株培养于含有10%胎牛血清、10 g/L非必需氨基酸、10 g/L谷氨酰胺和青霉素-链霉素双抗液的DMEM完全培养基，在37℃、5%CO2条件下培养，3 d可基本融合。将Caco-2细胞接种于Transwell板上(孔径0.8 μm)，接种密度为1×104/cm2，隔日换液，直至形成紧密单层，用于后续实验。

1.2.2 制备药品原液 吉非替尼(250 mg/片)研磨制成粉末，溶于DMEM培养基，配制成250 μg/ml的药物原液;紫龙金片(0.65 g/片)制成粉末，溶于DMEM培养基配制成650 μg/ml的药物原液，置于－20℃保存，实验前用无血清DMEM培养液稀释成所需浓度。

1.2.3 分组 待Caco-2细胞成紧密单层后，做同步化培养。然后将其分为:正常对照组(组1)、吉非替尼组(组2)和紫龙金片联合吉非替尼组(组3)，组2、组3根据预处理时间又分为12、24 h亚组。……