喻 陆 史春夏(解放军305医院，北京 0007)

线粒体DNA(mtDNA)损伤学说认为衰老是因为机体组织线粒体缺乏DNA损伤修复机制，从而导致mtDNA氧化损伤累积所致，主要是mtDNA缺失突变引起线粒体氧化磷酸化功能受损，导致能量产出缺陷、衰老、死亡〔1〕。国内外研究表明，哺乳动物mtDNA损伤随增龄积累，且与生物衰老之间存在高度的相关性〔2〕。松花粉药名松黄，是一种营养价值高、药理作用广的中药，我实验室前期的研究显示松花粉具有较好的抗成纤维细胞衰老的作用〔3〕，因此本次实验研究松花粉对衰老成纤维细胞mtDNA缺失突变的影响，以期进一步阐释松花粉延缓细胞衰老的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞培养、分组与处理 人胚肺2BS细胞由北京生物制品研究所建株，28代引入。培养于15%胎牛血清的DMEM培养基中，37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中生长。体外培养最多可分裂60～70代。一般认为30代以下为年轻细胞，55代以上为衰老细胞。至30代时随机取8瓶作为年青对照组，至56代时随机取16瓶分成衰老组、松花粉组，每组 8瓶。参照文献〔4〕配制松花粉血清液，使其终浓为240 mg/dl(松花粉处理组);对照组分为青年组、衰老组。松花粉组从28代起使用松花粉血清液连续培养2BS细胞;对照组从28代起连续培养，采用对照培养基(同体积DMEM培养基)培养。当细胞融合度约90%时，按1∶2或1∶4传代，细胞传代后如3周内不能融合，则停止传代。

1.2 仪器与试剂 松花粉由中国林业学院亚热带林业研究所提供，为天然破壁松花粉。PCR仪(美国Perkin-Elmer公司，9600型);凝胶成像仪(Bio-Rad)。类标准胎牛血清(FBS)购自民海生物，DMEM培养基(含非必需氨基酸、谷胺酰胺)为Invitrogen产品。……