庞 英，李 敏，张剑波，姚 斌

(四川省医学科学院·四川省人民医院a.儿科，b.医学中心实验室，四川 成都 610072)

支气管哮喘是儿童时期常见的慢性呼吸道疾病，越来越多的研究表明，CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells，Tr)在哮喘的免疫调节中发挥重要作用［1］，且CD4+CD25+Tr自身存在多种 Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)表达，TLR信号可以直接影响其功能［2］。本研究通过建立哮喘小鼠动物模型，探讨CD4+CD25+Tr及该细胞上的TLR4的表达在哮喘发病中的变化，并观察糖皮质激素对其影响，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验对象 雌性BALB/c小鼠30只，SPF级，6～8周龄，体重(22.12±2.52)g，购于四川大学华西实验动物中心，按随机数字表法分为三组:正常对照组(NS组)、哮喘组(OVA组)和哮喘糖皮质激素治疗组(OVA/GC组)各10只，分笼饲养，喂食不含致敏原的特殊饲料。

1.2 仪器与试剂 主要实验仪器有低速离心机，由科大创新股份有限公司中佳分公司提供;压缩雾化吸入器，由台湾雅博股份有限公司提供;CYTOMICSFC500流式细胞仪由美国BACK MAN COULTER公司提供等。主要实验试剂包括鸡卵蛋白，购于美国Sigma公司;氢氧化铝(分析纯)，购于成都天成化学试剂厂;小鼠淋巴细胞分离液，购于天津TDB生物技术发展中心;Anti-Mouse CD4 PE-Cy5、Anti-Mouse CD25 PE、Anti-Mouse CD284(TLR4)AlexaFluor 488及相应同型对照等，购于美国eBioscience公司。按操作说明书进行操作和配制。

1.3 动物模型制备 参照沈华浩等［3］和 Sakai等［4］提出的方法略加调整制备哮喘动物模型。即分别于实验当日和第14天NS组予以生理盐水0.2 ml腹腔注射，OVA组、OVA/GC组小鼠采用腹腔注射OVA/Al(OH)3混合液致敏0.2 ml(含OVA 100 μg，AL(OH)32 mg);从实验第21天起开始，NS组用37℃生理盐水雾化吸入30 min，OVA组、OVA/GC组以2%OVA每天雾化30 min，连续雾化5天激发制备哮喘模型，OVA/GC组于每次激发前30 min腹腔注射地塞米松(1 mg/kg)。……