宋红苗，马 杰，徐祥彬

(杭州师范大学 生命与环境科学学院，浙江 杭州 310036)

从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是进行分子生物学方面研究，如 cDNA合成、Northern杂交、mRNA分离、RT-PCR、cDNA文库构建及体外翻译等的必要前提和关键。许多生物材料在提取核酸时，都会遇到多糖的污染问题。多糖的许多理化性质与RNA很相似，很难将它们分开，在去除多糖的同时RNA也容易被裹带走，造成RNA产量的减少。在沉淀RNA时，也容易产生含有多糖的RNA凝胶状沉淀，这种RNA沉淀难溶于水，或溶解后产生粘稠状的溶液。此外，多糖还可以抑制许多酶的活性［1］，因此污染了多糖的 RNA样品无法用于进一步的分子生物学研究。

果实中富含多糖类物质，在提取过程中能与RNA共同沉淀，很难将其分开，从而影响RNA的质量，影响进一步的分子生物学研究。为了能获得高质量的RNA，我们对果实RNA提取技术进行了探索。通过反复探索，我们利用醋酸钾沉淀多糖，结合多次氯仿抽提和LiCl沉淀RNA的方式，得到了一个可以在冬枣、葡萄、甜樱桃、桃、番茄等含不同丰度多糖的果实中适用的RNA提取方法。

1 材料与方法

1.1 材料

供试果实有葡萄，甜樱桃，冬枣，桃子和番茄。

供试生物化学试剂有水饱和酚、氯仿、醋酸钾、Tris碱、70% 乙 醇、SDS、DEPC、NaCl和LiCl。

溶液配制参照分子克隆实验指南第2版。

RNA 提 取 液 配 制:50 mmol·L－1Tris-HCl(pH 值 9.0)，100 mmol NaCl，1%SDS。

1.2 RNA提取和检测

取果实10 g，置液氮中研磨成粉末，转移至经DEPC处理过的50 mL离心管中，然后加入20 mL预热到65℃的水饱和酚/RNA提取液(7 mL水饱和酚，13 mL RNA提取液)，混匀后剧烈振荡10 min，再加入10 mL氯仿，混匀，4℃静置5 min，10 000 g离心……