张 林，侯艳红，张 健，胡 静，张 静

1.解放军第309医院消化内科，北京100091;2.解放军第四军医大学分子生物学教研室

近年来随着肿瘤治疗技术的不断进步，分子靶向药物的出现和大规模运用于临床已成为人类肿瘤治疗上新的希望。目前进入临床治疗胃癌的主要是EGRR单克隆抗体类药物，在实际对胃癌患者的在治疗中表现出一定的效果。双特异性抗体(BsAb)是一种人工合成的具有同时识别并结合两种无关抗原的单个抗体分子。利用双功能抗体的桥接作用将体内的T淋巴细胞等效应细胞募集到肿瘤组织周围起到良好的抑瘤作用，目前已有部分研究报道［1-2］。本研究旨在通过初步的化学合成抗EGFR/抗CD3双功能抗体，并通过体外实验初步验证抗EGFR/抗CD3双功能抗体对胃癌细胞的杀伤能力。

1 材料与方法

1.1 材料 胃腺癌细胞系SGC7901为解放军总医院老年消化病实验室保存，抗人EGFR单克隆抗体、抗人CD3单克隆抗体均购自美国Abcam公司，N-琥珀酰亚胺3-(2-吡啶二硫基)丙酸盐(SPDP)、二硫基苏糖醇(DTT)及MTT均购自美国Sigma公司。普通细胞培养板、培养瓶购自比利时 Orange公司，ThemoLabsystems酶标仪(美国Thermo Electron公司)，倒置相差显微镜及荧光显微镜均购自日本OLYMPUS公司。

1.2 方法

1.2.1 抗EGFR/抗CD3双功能抗体(BsAb)制备:采用化学耦连法按Chen等［3］步骤进行，抗人EGFR单抗和CD3单抗各取1 mg/mL分别在中性PBS缓冲液中于4℃透析10 h。取SPDP乙醇溶液，按8∶1比例分别加入抗人EGFR单抗和抗CD3单抗于透析袋中混匀，室温反应30 min，将抗人EGFR单抗以0.1 mol/L pH 4.5的醋酸盐缓冲液透析，抗CD3单抗则以0.1 mol/L pH 7.5的PBS透析，每2.5 h换透析液1次，共换3次。取等体积经处理的抗人EGFR单抗和抗CD3单抗，混合后加入适量DTT至终浓度50 mmol/L，室温摇匀30 min，4℃下以PBS透析10 h，中间换透析液4次。……